副黄假单胞菌CRS01-1中新型天然产物的挖掘

Microbial natural product plays an important role in disease prevention for humans, animals, plant protection and crop yield. Pseudomonas fulva CRS01-1 is a broad-spectrum antagonistic bacterium of plant pathogenic bacteria, and it shows antagonistic ability against Acidovorax avenae subsp.avenae (bacterial brown stripe), Burkholderia glumae (grain rot), Pseudomonas fuscovaginae (bacterial sheath brown rot), Rhizocto-nia solani (sheath blight) and Sitophilus oryzae (sheath rot), but its antagonistic mechanism is still unknown. Bacterial secondary metabolites have an important antibacterial mechanism. There are various secondary metabolites biosynthetic gene clusters presented in the CRS01-1 genome, and these secondary metabolites may be related to its antagonistic mechanism. In this study, the novel gene cluster of natural products was identified through gene knockout, in-situ activation and heterologous expression, and the target compounds can be isolated for structure elucidation and biological activity. Moreover, the antibacterial metabolites with novel structure and activity can provide valuable resources for the development of new antimicrobial agents and also provide the reference for the discovery of new natural products in other biocontrol agents.

微生物天然产物不仅用于人类和动物的疾病防控，在植物保护、作物增产等方面也贡献巨大。副黄假单胞菌CRS01-1是从水稻种子中分离到的植物病原菌广谱拮抗细菌，对水稻纹枯病原菌、稻种病原菌酸囊菌、水稻细菌性谷枯病原菌、水稻鞘褐腐病原菌和米曲霉等病原菌具有很好的拮抗效果，但迄今其拮抗机理未知。细菌的抗菌机理有很多种，其中产生的次生代谢产物是一个重要因素。CRS01-1基因组中存在多个次级代谢产物生物合成基因簇，这些次级代谢产物可能与其拮抗机制相关。本研究拟采用基因敲除、原位激活和异源表达的方法对该菌株中的新型天然产物合成基因簇进行挖掘，对新发现的天然活性产物进行结构鉴定和生物活性测定，从次级代谢产物角度阐释副黄假单胞菌拮抗病原菌的机理。同时发现结构新颖且活性突出的抗菌代谢产物，为开发新的抗菌药物提供更多宝贵的菌株资源，以及为其它生防菌中新型天然产物的挖掘提供参考和借鉴。

微生物天然产物不仅用于人类和动物的疾病防控，在植物保护、作物增产等方面也贡献巨大。副黄假单胞菌CRS01-1是从水稻种子中分离到的植物病原菌广谱拮抗细菌，测序序列表明该菌含有多个次生代谢产物生物合成基因簇。本研究在CRS01-1中评估了一系列假单胞菌特异性重组系统（TEPsy、PluTEPsy、RedTEPsy、BAS、PluBAS和RedBAS）的重组效率，其中RedTEPsy具有最高的重组效率，并对该重组系统进行优化。通过高效基因重组系统，采用基因敲除和原位激活的方法，对四个BGC失活突变体和野生型CRS01-1提取物的LC-MS分析表明，BGC1和BGC2可以产生两种特定类别的化合物，根据核磁共振数据和氨基酸水解实验分析，这两种化合物确定为viscosin和massetolide B，生物信息学成功预测了它们的生物合成途径，更进一步的生物活性测定结果显示它们均对枯草芽孢杆菌有抑制活性。这些抗菌代谢产物的挖掘，为开发新的抗菌药物提供更多宝贵的菌株资源，以及为其它生防菌中新型天然产物的挖掘提供参考和借鉴。