基于PPAR-γ介导TGF-β1/Smad通路、调控EMT探讨清肠化湿方抑制炎症性肠病肠纤维化

Intestinal fibrosis is a common complication of inflammatory bowel disease(IBD), without any effective antifibrotic drugs to date.The pathogenesis of IBD-associated intestinal fibrosis is very complicated. Recent researches indicate that peroxisome proliferator activated receptor-γ(PPAR-γ) might be involved in the development of intestinal fibrosis. PPAR-γ inhibits epithelial-mesenchymal transition(EMT) through TGF-β1/Smad pathway, reducing the collagen synthesis and improving intestinal fibrosis eventually.The antifibrotic effect of QingChangHuaShi Decoction on intestinal fibrosis in IBD has been observed clinically.Meanwhile, our previous animal studies found that QingChangHuaShi Decoction ameliorated intestinal fibrosis induced by 2,4,6-trinitrobenzene sulphonic acid(TNBS), and other relevant researches also discovered that some components of it had antifibrotic effects in multiple organs. Accordingly, this study is designed to explore the role of PPAR-γ in intestinal fibrosis in IBD, using in vivo and in vitro experiments. Meanwhile, we want to explore the effect of QingChangHuaShi Decoction on intestinal fibrosis and the underlying mechanisms, which seems to be mediated by up-regulation of PPAR-γ expression, inhibition of TGF-β1/Smad pathway , down-regulation of EMT and prevention of collagen synthesis.This may help to provide some experimental data to solve the problem of intestinal fibrosis.

肠纤维化是炎症性肠病（IBD）常见的并发症，但目前尚无有效治疗药物。肠纤维化机制复杂，研究发现过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）可能在肠纤维化发病机制中起重要作用，PPAR-γ可通过下调TGF-β1/Smad信号通路，抑制上皮间质转化（EMT），减少胶原合成而抑制肠纤维化。我们临床发现清肠化湿方能够减轻IBD患者肠纤维化症状，同时前期动物实验发现清肠化湿方对三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的肠纤维化有抑制作用，亦有多项研究显示拟方中多个组分在多种脏器具有抗纤维化效应。基于此，本课题采用体内外实验，探讨PPAR-γ在IBD肠纤维化中的作用，阐明清肠化湿方对肠纤维化的抑制作用及可能的机制：上调PPAR-γ，抑制TGF-β1/Smad信号通路，抑制EMT，减少胶原合成。从而为解决肠纤维化提供一定的实验依据。

炎症性肠病（IBD）在我国的发病率近年来呈明显上升趋势。肠纤维化是IBD常见的并发症之一。目前，肠纤维化机制的研究尚未引起足够重视，抗纤维化治疗进展缓慢，大部分药物无效。然而，中医药治疗本病具有较好优势，我们临床发现清肠化湿方能够减轻IBD患者肠纤维化症状，但其机制尚不清楚。本课题采用体内外实验，探讨（1）PPAR-γ 在小鼠肠纤维化模型中动态变化；（2）清肠化湿方可调控PPAR-γ表达、抑制肠纤维化；（3）清肠化湿方抑制肠纤维化的机制：上调PPAR-γ，介导TGF-β1/Smad通路，调控EMT。结果发现：（1）TNBS造模后，结肠组织PPAR-γ随时间表达减低，胶原随时间含量增加。（2）与对照组相比，模型组小鼠结肠长度缩短、结肠重量增加、胶原含量增加，PPAR-γ表达减少，COL1A2表达增加；清肠化湿方干预后能显著改善这些指标，以中剂量组效果最为明显。（3）TGF-β1诱导IEC-6细胞系PPAR-γ表达减少，COL1A2表达增加，清肠化湿方含药血清治疗后，PPAR-γ表达上调，COL1A2表达减少，以中剂量组效果最好。（4）与对照组相比，模型组小鼠的结肠长度缩短，结肠重量增加，胶原含量增加，TGF-β1表达增加，E-cadherin表达下降，β-catenin、α-SMA、CTGF、Fn1表达均增加；PPAR-γ抑制剂组与模型组相似；清肠化湿方和罗格列酮均能改善上述指标；清肠化湿方和PPAR-γ抑制剂同时干预后，上述指标改善，但效果差于清肠化湿方组。（5）TGF-β1刺激后，IEC-6细胞COL1A2表达增加，p-Smad3表达增加，PPAR-γ表达减少，E-cadherin表达下降、α-SMA和Fn1表达增加；PPAR-γ抑制剂组与模型组类似；清肠化湿方和罗格列酮干预后，COL1A2表达减少，PPAR-γ表达上调，EMT进程抑制；清肠化湿方和PPAR-γ抑制剂同时干预，以上指标改善，但治疗效果不及清化中剂量组。实验结果表明：清肠化湿方可上调PPAR-γ，抑制TGF-β1/Smad3通路，抑制EMT进程，显著改善肠纤维化；但清肠化湿方也不仅仅通过PPAR-γ起到抗纤维化作用。这对阐明清肠化湿方的抗纤维化效应及其机制具有十分重要的参考价值。