慢病毒介导siRNA靶向干扰PLTP表达对胆固醇逆向转运的作用

phospholipids transfer protein(PLTP) belongs to a family of lipid transfer protein. It has not only mediates lipoproteins metabolism and also modulates the transfer of cholesterol. The study have shown that both PLTP-deficient and PLTP-transgenic mouse plasma mediates less macrophage cholesterol efflux, but after adjusting for differences in high density lipoprotein(HDL) cholesterol concentration (both PLTP-transgenic and deficient mice have significantly lower HDL cholesterol levels than wild-type mice) to the same levels as wild-type mouse plasma, this difference was negated. The role of PLTP in reverse cholesterol transport(RCT) is still not clear (promote or inhibit). We speculated that may involve its impact on HDL remodelling and function. We intend to:①screen siRNA of high efficiency to stable silence PLTP gene expression, construct the recombinant vector and lentiviral packaging;② investigate the effect of specific siRNA interference of PLTP gene expression on HDL subclasses distribution, RCT, RCT related factors, along with arterial lesions in vivo and vitro. Based on the above mentioned, it is possible for us to clarify the relationship between PLTP expression and RCT，to provided the new evidence with PLTP as a new target in the prevention and treatment of atherosclerosis(AS).

磷脂转运蛋白(PLTP)作为脂质转运家族的一员，不但在脂蛋白代谢中起调控作用，还调节胆固醇的代谢。PLTP缺陷和PLTP转基因小鼠介导较少的巨噬细胞的胆固醇流出，但高密度脂蛋白(HDL)浓度差异调整(与野生型相比PLTP转基因和缺陷小鼠有显著的降低HDL水平)后与野生型小鼠相同的水平，这种差异就不存在了。PLTP在胆固醇逆向转运(RCT)中发挥何种作用(促进或抑制)？答案仍然不是很明确。我们推测，其可能涉及与动脉粥样硬化(AS)有关的HDL代谢和功能的变化。本项目拟通过：①筛选高效沉默PLTP表达的siRNA，构建表达siRNA的重组载体并进行慢病毒包装；②在整体动物和细胞水平，探讨siRNA下调PLTP表达，HDL亚类分布、RCT、RCT相关因子及动脉病变的变化。本研究将明确PLTP表达变化与RCT之间的关系，对于PLTP作为防治AS的新靶标提供新的依据。

磷脂转运蛋白(PLTP)是一种多功能蛋白，不仅存在于血浆中发挥脂质转运作用，而且存在于细胞高尔基体和内质网内参与脂蛋白的成熟与分泌。PLTP在脂蛋白代谢中的主要作用是磷脂转移活性，即调节高密度脂蛋白(HDL)颗粒大小和亚类组成，介导两个HDL的融合，产生大颗粒HDL2和Preβ-HDL,而磷脂转移时重塑HDL的先决条件。给PLTP小鼠喂养高脂肪饮食，其不再具有抗动脉粥样硬化(AS)的作用，提示PLTP在AS过程中的作用是复杂和多面的，需要进行更为细致的研究。但是PLTP在胆固醇逆向转运(RCT)中发挥何种作用(促进或抑制)，答案仍然不是很明确。其可能涉及与AS有关的HDL代谢和功能变化上。但目前对于从HDL亚类动态变化的角度探讨PLTP表达变化与RCT之间关系的研究则鲜有报道。我们的研究通过筛选高效沉默PLTP表达的siRNA，构建表达siRNA重组载体并进行慢病毒包装；将包装好的慢病毒液经尾静脉注入apoE基因缺失的小鼠并给以高胆固醇饮食喂养。结果显示与空病毒组比较，血浆HDL水平在病毒组呈现一个下降，大颗粒HDL浓度及百分比在病毒组高于空病毒组，并且中颗粒及小颗粒HDL浓度及百分比是低于空病毒组；此外，对于低密度脂蛋白(LDL)亚类的分析也发现，小而密低密度脂蛋白(sd-LDL)颗粒在空病毒组[mean LDL size (24.53 ± 0.15nm)]较病毒组[mean LDL size (25.04 ± 0.61nm)]更为显著。进一步研究显示表明，组织载脂蛋白AI (ApoAI), 三磷酸腺苷结合转运体AI (ABCAI), 卵磷脂-胆固醇酰基转移酶(LCAT), 肝脂酶(HL), 脂蛋白脂酶(LPL)以及B族I型清道夫受体(SR-B1)表达在病毒组较空病毒组有升高的趋势。与此同时， 病理组织学对于主动脉进行油红O染色结果也显示，病毒组小鼠其动脉粥样硬化病变程度较空病毒对照组减轻。所有这些资料提示沉默PLTP的表达有助于增强RCT。尽管HDL-C水平被认为是与AS发展负相关，但我们的结果却表明，我们更应该关注HDL颗粒的分布变化。PLTP作为AS发展的一个主要的危险因素，抑制PLTP表达则有助于RCT速率和效率的提高。因而，PLTP抑制剂也可能作为防治AS发生，发展的有效治疗措施。基于此，我们的研究则可能为PLTP抑制剂的临床使用提供了一定的理论依据。