miR-185对乳腺癌侵袭转移的影响及分子机制研究

MicroRNAs (miRNAs) can bind to 3’- untranslated region of diverse target genes mRNA and inhibit the synthesis of target genes protein, thus miRNAs play a relevant role in the biological regulation. Our previous studies show that the receptor of advanced glycation end (RAGE) can promote invasion and metastasis of breast cancer. Target genes prediction shows that RAGE is one of the target genes of miR-185. Preliminary experiment has proved that miR-185 can affect the protein level of RAGE in breast cancer cells. However, the function of miR-185 in breast cancer’s invasion and metastasis, as well as its mechanism of action, remains poorly understood. This study explores the function of miR-185 in the invasion and metastasis of breast cancer by the method of combination of tissue, cell and animal experiments. This study also elucidates whether miR-185 is targeted to bind RAGE mRNA, whether miR-185 affects the adhesion of breast cancer cells with the extracellular matrix and whether miR-185 is involved in the synthesis and degradation of matrix metalloproteinase, thereby contributing to the molecular mechanisms that cause breast cancer’s invasion and metastasis. Thus, this study could be a basis for new strategies that inhibit breast cancer’s invasion and prevent breast cancer’s recurrence.

MicroRNAs （miRNAs）能够与多种靶基因 mRNA 的 3’非翻译区结合，抑制靶基因蛋白的合成，从而发挥相应的生物学调节作用。我们前期研究结果显示高级糖基化终末产物受体（RAGE）能促进乳腺癌的侵袭和转移，靶基因预测RAGE是miR-185的其中一个靶基因，预实验已证实miR-185能影响乳腺癌细胞中RAGE蛋白的表达。然而miR-185影响乳腺癌的侵袭和转移及其作用机制目前尚不明确。本课题将采用细胞实验、组织标本及动物实验相结合的方法，探讨miR-185在乳腺癌侵袭及转移中的作用，并围绕miR-185是否靶向结合RAGE mRNA、是否影响乳腺癌细胞与细胞外基质的粘附、是否参与基质金属蛋白酶的合成及降解三个方面探讨miR-185引起乳腺癌侵袭转移的分子机制，为乳腺癌的治疗提供新的思路和靶点。

MicroRNAs （miRNAs）能够与多种靶基因 mRNA 的 3’非翻译区结合，抑制靶基因蛋白的合成 ，从而发挥相应的生物学调节作用。我们前期研究结果显示高级糖基化终末产物受体（RAGE） 能促进乳腺癌的侵袭和转移，靶基因预测RAGE是miR-185的其中一个靶基因。然而miR-185影响乳腺癌的侵袭和转移及其作用机制目前尚不明确。本项目应用荧光定量PCR检测正常乳腺上皮细胞及乳腺癌细胞中miR-185的表达，结果显示miR-185在乳腺癌细胞中的表达明显低于正常乳腺上皮细胞，而在高侵袭细胞MDA-MB-231中低表达，在低侵袭细胞MCF-7中高表达，结果表明miR-185在乳腺癌中起着抑癌基因的作用，而且与乳腺癌细胞的转移能力有关；应用miR-185高表达慢病毒上调MDA-MB-231中的miR-185，用RNA干扰慢病毒下调MCF-7中的miR-185，结果显示感染效果明显；应用Transwell 细胞侵袭实验检测 miR-185 对乳腺癌细胞的侵袭和转移的影响，结果显示上调miR-185明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移能力，而下调miR-185明显促进乳腺癌细胞的侵袭和转移能力；机制研究发现miR-185可以直接与RAGE mRNA的3’-非翻译区结合调控RAGE蛋白的表达，miR-185还可以通过影响乳腺癌细胞肌动蛋白丝（F-actin）聚合及细胞的上皮-间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）从而影响乳腺癌细胞的侵袭和转移；为了进一步证实miR-185的抑癌基因作用，我们应用荧光定量PCR检测乳腺癌组织及癌旁相对正常乳腺组织中miR-185的表达，结果显示miR-185在乳腺癌组织中的表达明显降低，其表达与乳腺癌的肿瘤大小，肿瘤分级，淋巴结转移，远处转移，E-cadherin及vimentin的表达呈密切相关性；动物实验结果显示miR-185能明显抑制裸鼠转移到肺的肿瘤结节的数量。所有结果表明miR-185可以通过多种方式抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移，这一结果可以为临床抑制乳腺癌的侵袭及预防乳腺癌的转移提供一个新的指标。