葎草花粉主要变应原致SHP-1低表达个体季节性过敏性哮喘的内表型（endotype）假说模型研究

花粉能否引起季节性过敏性哮喘在学术上富有争议。我科目前发现葎草花粉引起的过敏性哮喘在中国具有重要流行病学意义，并鉴定了其主要致敏蛋白Hum j 3。而最新研究已用动物模型阐明SHP-1蛋白在过敏性哮喘中的重要作用。本研究的目标是证明：葎草花粉引起的季节性哮喘主要是由大气中携带有Hum j 3蛋白的可吸入颗粒作用于SHP-1蛋白低表达的致敏个体引起。为此，拟对葎草花粉释放含Hum j 3颗粒的过程、机理、致敏性以及大气生物学特点进行研究；构建Hum j 3致SHP-1缺陷小鼠过敏性哮喘的动物模型；并对确诊为Hum j 3致敏的季节性哮喘患者的SHP-1表达进行分析；并评估对SHP-1靶点进行干预后对细胞炎症表达影响。这将是首次以"哮喘endotype假说"为模型，系统探讨Hum j 3和SHP-1两个靶向分子在葎草花粉致季节性哮喘发病机制中重要作用的研究。

本研究利用抗体亲和层析及凝胶过滤技术批量纯化获得了高纯度的葎草花粉主要致敏蛋白Hum j 3，并确认其为一种高峰度的致敏蛋白，占总可溶性蛋白的10%以上；以双向电泳、免疫印迹技术、ELISA等方法证实在葎草花引起的过敏性哮喘患者血清中，该主要致敏蛋白对应的sIgE滴度最高。通过连续三年的夏秋季大气花粉生物学监测，证实大气中存在可吸入的、含有葎草花粉主要致敏蛋白Hum j 3、5μm左右、具有免疫学活性的葎草花粉变应原破碎颗粒。以免疫透射电镜进一步确认了葎草花粉主要致敏蛋白主要分布在细胞质、线粒体等亚微结构中，较少分布在胞核中。花粉在水或缓冲液中萌发时，该主要致敏蛋白在30秒至1小时时间内即快速向细胞壁和气囊扩散渗出；0.5-48h葎草花粉蛋白溶出研究的动态监测结果显示，1h时50%的葎草花粉主要致敏蛋白已经溶出。通过对大气样本中的葎草花粉及其主要致敏蛋白浓度的监测，发现北京地区葎草花粉播散的高峰期在8月15至9月15日之间，占全年总数的79.8%-86.4%；日最高浓度在8月24-30日之间，峰值区间为200-392grains/1000mm2。上述研究进一步明确了葎草花粉主要致敏蛋白在过敏性哮喘中的作用及可能机制。现正汇总同期空和气样本中能监测到的葎草主要致敏蛋白浓度数据，分析与葎草花粉浓度之间的相关性，以及与气象条件等影响因素之间的相关性。在上述数据搜集基础上，基本构建完成气传变应原监测网络平台。课题组拟于2015年在建立肺功能过敏动物模型研究平台后，开展“葎草花粉主要变应原Hum j 3致SHP-1低表达个体季节性过敏性哮喘”的动物模型研究。课题组已基本建立“葎草花粉主要变应原Hum j 3致SHP-1低表达个体季节性过敏性哮喘”的临床研究数据库，对符合伦理申请中入选条件的受试者进行了葎草花粉过敏性哮喘相关临床特征的问卷调查、肺功能检测、血清学及皮试、并搜集了外周血单个核细胞冻存，拟于2015年完成该部分研究。