FXR-NTCP-胆汁酸通路影响HBV复制的机理研究

Developing new anti-HBV drugs and finding new drug targets is still a word problem .NTCP is a HBV specific receptor ,binding with PreS1 protein of HBV to mediate HBV into cell for replication , which may affects bile acid and intestinal flora homeostasis. Farnesoid X receptor agonists can promote the expression of downstream target gene called SHP, inhibiting the expression of the key enzyme of cholesterol in bile acid synthesis called 7α-hydroxylase and bile acid receptor called NTCP. It also can infect the activity of STAT3. STAT3 is essential to the transcription of HBV cccDNA. Based on this ,we propose that FXR receptor agonist participate in HBV replication through two mechanisms .One is to inhibit HBV binding with NTCP and invading hepatocytes, the other is to prevent STAT3 phosphorylation and suppress HBV genome replication by activating downstream target genes SHP. We determine the abnormal bile acid metabolism in patients with hepatitis B and intestinal flora composition by comparing the metabolic indexes of hepatitis B patients and normal people . We plan to explore the mechanism that FXR agonists inhibit HBV replication by clinical trials and humanization mouse model, providing theoretical basis for new antiviral drugs.

研发新型抗乙肝病毒药物和寻找新的抗乙肝病毒作用靶点仍是世界性难题。HBV的PreS1与肝细胞的HBV受体及胆汁酸转运受体NTCP结合而进入细胞内，影响肝脏胆汁酸代谢以及肠道内菌群稳态。类法尼醇X受体激动剂促进下游靶基因SHP的表达，抑制STAT3的磷酸化及核转位，也抑制NTCP和胆汁酸合成关键酶CYP7A1的表达。STAT3活性对于HBV的病毒转录和复制至关重要。因此，我们提出“FXR受体激动剂一可调节胆汁酸代谢及肠道菌群稳态，抑制NTCP表达并阻止HBV入侵肝细胞；二可激活下游SHP靶基因，阻止STAT3的磷酸化及入核，抑制HBV基因组复制”的假说。本项目拟研究HBV病毒入侵和复制与胆汁酸代谢及肠道菌群的关系，进一步采用临床试验和人源化小鼠模型确定FXR激动剂对HBV病毒复制、胆汁酸代谢和肠道菌群构成的影响及其具体机制，为新型抗乙肝病毒药物的研发进行理论探索。

背景：乙肝病毒感染持续存在导致的长期肝脏慢性炎症，若不及时治疗6-20%乙型肝炎患者在5年内可迁延为肝硬化，部分可转变为肝癌。75%乙型病毒性肝炎发生于亚洲和非洲，研发新型抗乙肝病毒药物和寻找新的抗乙肝病毒作用靶点仍是我国卫生领域需要攻克的重点难题。类法尼醇X受体（FXR）是胆汁酸代谢调节的重要分子，其激动剂奥贝胆酸可促进下游靶基因SHP的表达，进而抑制胆汁酸合成关键酶CYP7A1的表达。奥贝胆酸对病毒性肝炎的作用尚不清楚。.方法和研究内容：参考最新指南制定纳入标准和排除标准，收集乙肝患者和健康对照的既往临床记录，包括基本信息、症状、实验室数据和影像学检查等，利用HPLC-MS/MS检测两组血清胆汁酸谱。动物实验中将8周大小的C57BL/6小鼠随机分为三组：对照+安慰剂组，ConA模型+安慰机组和ConA模型+奥贝胆酸组，其中模型组小鼠尾静脉注射刀豆蛋白（14 mg/kg），对照组给与同体积生理盐水。8小时后处死小鼠，收集血液、肝脏备用。.重要结果和关键数据：临床结果显示与健康对照相比，乙肝患者血清总胆汁酸、结合型胆汁酸且结合型与非结合型胆汁酸的比例均明显升高，乙肝患者 NTCP 的表达水平明显高于健康对照。小鼠实验证实刀豆蛋白尾静脉注射可导致ALT，AST水平急剧升高，并诱导与病毒性肝炎类似的病理改变。奥贝胆酸处理可明显降低小鼠血清ALT, AST水平，HE染色结果显示小鼠肝脏坏死程度和炎症细胞浸润明显减轻。与安慰机组相比，奥贝胆酸处理组小鼠ALT, AST水平明显下降，qPCR结果显示奥贝胆酸可降低模型组小鼠肝脏中胆汁酸代谢关键酶Cyp7a1以及 等炎症因子的表达。Western blot结果提示奥贝胆酸可影响hippo pathway通路，导致YAP蛋白表达降低且p-YAP/YAP比例升高,且YAP的下游靶基因Cry61的表达下降。.科学意义和结论：乙肝患者存在胆汁酸代谢紊乱，胆汁酸代谢调节药物奥贝胆酸可减轻刀豆蛋白诱导的肝脏炎症损伤并抑制肝脏炎症因子的表达。本课题研究结果提示奥贝胆酸作为潜在的抗乙肝病毒药物，其机制可能是通过抑制cyp7A1的表达，恢复胆汁酸代谢稳态并激活Hippo通路。