响铃豆及其近缘种中PPARr天然拮抗剂的发现与构效关系研究

This project intends to systematically isolate isoflavones of Crotalaria albida and its relatives, and adopt the dual-luciferase reporter gene system, to systematiclly screen different types of isoflavones, for discovery of the natural antagonist of PPAR-γ receptors, and combined with the structural modification of the method, to research their structure-activity relationship, applying western blot analysis and scintillation proximity assay to explore their mechanism.

本课题拟对响铃豆及其近缘种中异黄酮类成分进行系统的分离、纯化和结构鉴定，采用双荧光素酶报告基因系统，对不同类型的异黄酮类成分进行系统的筛选，以其发现具有抑制PPAR-γ受体作用的天然拮抗剂，并结合结构修饰的方法，进行构效关系研究，同时采用蛋白质印迹法和亲近闪烁检测法对其作用机理进行探讨。

利用多种色谱技术对豆科野百合属植物响铃豆Crotalaria albida Heyne; 野百合Crotalaria sessiliflora L.；猪屎豆Crotalaria pallid Ait.进行了化学成分研究，共分离得到107个化合物，其中14个为新的化合物，分别命名为：neocroalbidine，neocroalbidinone，crotadihydrofunan A, B, C，D，sessiliflorin A, B，pallacacetin，usaramine -N-Oxide，pallivone B，pallivone A，Pallisine A, B。通过双荧光素酶报告基因的系统筛选，发现响铃豆素A、B、C具有良好的PPAR-γ拮抗作用，并能抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化。通过Real-time PCR检测技术，发现响铃豆素A、B、C可显著抑制3T3-L1细胞中PPAR-γ靶基因mRNA（FAS、 ACO、ACC、LPL等基因）的表达，以及PPAR-γ本身的表达。蛋白印迹法进一步证明，响铃豆素A、B、C是通过抑制PPAR-γ靶基因的作用来抑制脂肪细胞分化的。时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)法实验结果表明，响铃豆素A与罗格列酮相似，能够与核受体蛋白直接结合,并由分子对接模拟实验进一步证实。.以丹皮酚和2,6-二甲氧基苯甲醛为起始原料，通过19步反应全合成得到了响铃豆素A。通过响铃豆素A对高脂餐诱导的C57BL/6肥胖型小鼠减肥、降糖、降脂作用研究，表明响铃豆素A在不影响小鼠进食量的前提下，可降低模型小鼠的体重和脂肪含量，降低血清中TG以及HDL-C的含量，并改善小鼠葡萄糖耐受量，胰岛素耐量和瘦素利用水平。.以上结果表明，响铃豆素A可成为治疗肥胖症、II型糖尿病等代谢综合征的先导化合物或潜在的药物。