gO在巨细胞病毒的细胞相关性传播中逃逸体液免疫的机制研究

CMV以细胞相关性传播逃逸体液免疫，是感染难以清除的重要原因。病毒糖蛋白gH/gL介导的细胞-细胞融合是病毒细胞相关性传播的主要机制。gO是与gH/gL结合形成gH/gL/gO复合体的病毒糖蛋白。本课题组发现，抗CMV血清和gH抗体可阻断gO敲除病毒的细胞相关性传播，提示gO可能通过其抗gH抗体作用与CMV的体液免疫逃逸相关。本项目拟用Red/ET重组技术构建系列基因敲除病毒，其中可与gH/gL形成复合体的蛋白分别被敲除。通过研究gH抗体对gO敲除病毒细胞相关性传播的特异性阻断作用，以及比较gH抗体对细胞膜上瞬时表达的gH/gL和gH/gL/gO所介导的细胞-细胞融合作用的影响，揭示gO通过特异性抗gH抗体作用促进病毒细胞相关性传播从而逃逸体液免疫的机制。通过本课题研究为阐明CMV感染者体液免疫失能的机制提供理论和实验依据，为阻断CMV的体内传播及疫苗的研制提供科学依据。

研究背景：巨细胞病毒（HCMV）毒株的混合感染在AIDS患者中与高病毒载量和严重的HCMV疾病相关。然而，与此相关的致病机制却不清楚。同时，HCMV感染是否是糖尿病的致病因子尚存在争议。HCMV感染虽然已证实与心血管病患者的动脉粥样硬化发生相关，但是其在糖尿病的发生发展中的作用尚不清楚。本研究目的在于通过对AIDS患者中HCMV糖蛋白gB, gO和 gN多态性的分子流行病学调查以及糖蛋白之间的相互作用对HCMV病毒载量影响的分析，了解糖蛋白变异和变异糖蛋白之间的相互作用与HCMV毒力的关系，探讨HCMV的致病机制。同时，通过研究HCMV感染对2型糖尿病患者血糖调节和糖尿病并发症的影响，研究HCMV感染对2型糖尿病发生发展的作用。.研究内容及结果之一：60名晚期AIDS患者（CD4+ count < 100/mm3）中用同时检测多个糖蛋白基因（gB, gO和gN）的多态性，分析了这些糖蛋白的多态性与病毒载量的关系。71%的AIDS患者为HCMV混合感染。gB1、gO1a和 gN4a是感染者中的HCMV优势毒株，分别占86.96%,、78.8%和49.2%。 gN4a基因型感染能显著增加HCMV在血中的病毒载量(P=0.045)。同时我们发现了一个新的糖蛋白gO1a/gN4a linkage，其在HCMV混合感染的AIDS患者中占到51.5%，并与AIDS患者中病毒载量的增高呈显著相关(P=0.025)。.研究内容及结果之二：在对222名2型糖尿病患者的研究中，HCMV的活动性感染、病毒载量和HCMV IgG滴度水平与血糖调节无关。然而，患者HCMV IgG 滴度>500 U/ml时则与糖尿病患者的动脉粥样硬化的发生相关(OR: 8.0, 95%CI: 2.3–27.2)。多因素回归分析发现HCMV IgG 滴度>127 U/ml是2型糖尿病患者发生动脉粥样硬化的独立预测因子(OR: 4.6,95%CI: 1.9–11.3)。.科学意义：本研究揭示了糖蛋白gN4a以及gO1a和gN4a的相互作用在增强HCMV的毒力方面起重要作用的新发现，为HCMV的致病性研究提出新观点和进一步研究的新思路。同时阐明了HCMV感染对2型糖尿病动脉粥样硬化发展方面的作用，提高了HCMV感染对糖尿病动脉粥样硬化影响的认识，提出加强对2型糖尿病患者动脉粥样硬化HCMV感染的监测和提出监测指标，