参麻益智方对血管性痴呆大鼠外泌体miRNA及miRNA-mRNA网络调控研究

The discovery of exosome miRNA has become a hot topic in the early diagnosis and therapeutic targets of vascular dementia. It provides a new idea for the research in multi-target intervention mechanism of Traditional Chinese Medicine compound prescriptions. Previous studies have shown that Shenma Yizhi prescription has a good effect on the treatment of mild and moderate VD. Based on this, research team propose the hypothesis "The effective regulation of the specific expression of exosome miRNA and miRNA-mRNA network in VD is one of the main target of Shenma Yizhi prescription on the prevention and treatment of VD. " Accordingly,this subject use exosome miRNA chip technology、biological information method to screen VD specific miRNA and construct miRNA-mRNA network. We observe the regulatory effect of Shenma Yizhi prescription on the miRNA and miRNA-mRNA network. At the same time, we provide the basis for the discovery of molecular biomarkers associated with the early diagnosis of VD through the study.

外泌体miRNA的发现成为血管性痴呆（Vascular Dementia，VD）早期诊断与治疗靶点研究热点，为中药复方多靶点干预机制研究提供了新思路。既往研究显示参麻益智方治疗轻中度VD有良好效果，在此基础上，课题组进一步提出“对VD外泌体 miRNA的特异表达及其miRNA-mRNA网络的有效调控是参麻益智方防治VD的主要作用靶点之一”的假说。因此，本课题利用外泌体 miRNA芯片技术、生物信息学方法，筛选VD目标miRNA，构建miRNA-mRNA网络，观察参麻益智方对该miRNA及miRNA-mRNA网络的调控作用。同时通过该研究，为与VD早期诊断相关的分子生物标记物的发现提供依据。

血管性痴呆(VaD)是仅次于阿尔茨海默病( Alzheimer’s disease，AD) 的第二大痴呆类型，给患者的家庭及社会带来巨大的生活和经济负担。近年来，microRNA 成为神经退行性疾病研究的热点。有文献报道约70%的已知miRNA在脑组织中存在表达；调控了与突触发生、轴突生长、神经元可塑性、血管新生等重要过程的关键信号分子，与AD、PD等神经退行性疾病的发生和发展密切相关。但目前miRNA对VaD病理进程的作用尚不明确。参麻益智方（SMYZD）针对血管性痴呆“气虚-血瘀”而立，是临床上治疗VaD的常用方并取得了较好的疗效，但是作用机制不明确。本研究以双侧颈总动脉结扎大鼠（2-VO）作为研究VaD的模型，首先利用高通量测序技术筛选出VaD大鼠差异表达miRNA，采用qPCR技术验证筛选出的miRNA，进一步挖掘miRNA对应的靶基因mRNA，建立miRNA-mRNA网络。并在此基础上进一步观察参麻益智方对2-VO大鼠认知功能和miRNA-mRNA网络的影响。研究发现2-VO大鼠海马组织中12个差异表达miRNA，进一步qPCR验证发现miR-200b-3p表达最高，PPI分析、Cytoscape 技术明确 miR-200b-3p靶基因VEGF-A，ET-1，c-Jun。最后SMYZD可以改善2-VO大鼠的学习记忆能力，减少海马神经元丢失，其内在机制为提高2-VO大鼠海马区miR-200b-3p的表达，降低miR-200b-3p的靶基因ET-1、VEGF-A及c-Jun的转录水平。