发热大鼠脑组织PGE2灭活主通路的鉴定及桂枝汤活性成分对之的影响

中枢前列腺素E2以旁分泌形式作用于邻周细胞，参与一系列基本生理病理过程，也与脑血管、肿瘤、神经退行性病变等多种重大疾病发生、发展、治疗和预后密切相关。近年来基本明确脑区血管及其近周组织为中枢PGE2合成源地，至于其主要消除/灭活或途径，至今仍不清楚,更缺少有效评价方法。本项目是在发现大鼠脑组织能够高效转化的、且不属于两条经典代谢通路（15-PGDH和CYP450）的PGE2未知代谢物的基础上，拟利用近年来发展迅速的脂类组学研究技术，鉴定该代谢物，籍此发现脑区新的代谢靶酶甚或代谢/灭活通路，并建立一种评测该靶酶或通路代谢/灭活效率的新方法，继而利用该方法评价经方桂枝汤主要体温调节有效成分桂皮醛、桂皮酸、桂皮醇以及芍药苷的相关药效，进一步阐明桂枝汤体温调节的作用机理和物质基础，也为研究与中枢PGE2相关的病理和疾变以及医学干预评价提供新的思路、方法和靶系统及其评价手段。

旁分泌激素前列腺素E2（PGE2）参与了中枢诸多病理生理过程，然而其局部灭活主途径仍不确定。15-羟基前列腺素脱氢酶（15-PGDH）是公认的PGE2灭活启动限速酶，在利用经典方法测试其活性的过程中，我们发现了一个不属于该代谢途径且占比较大的未知PGE2代谢产物。据此，本课题进行了如下研究并发现：（1）在重现该反应的基础上，综合利用现代分析化学方法鉴定该代谢物为前列腺素A2（PGA2）—— 一种较之前体具有很强抗肿瘤抗病毒代谢物，但PGE2→PGA2催化反应机制和功能不明；（2）利用液质联用技术，建立了同时检测PGE2→PGA2和15-PGDH通路共7种前列腺素类物质的方法，对酵母诱导发热大鼠下丘脑组织和下丘脑15-PGDH活性测定孵育液分别进行了比较测定，结果显示①不论体内组织还是体外孵育系统，PGA2含量或浓度均远大于15-PGDH的5个产物甚至5个产物之和，提示PGE2→PGA2通路较之公认的15-PGDH通路在下丘脑PGE2灭活中更具重要意义，同时提示传统的15-PGDH测试方法条件值得商榷，至少孵育系统亟需改进；②PGE2→PGF2通路流量在体内还是体外孵育系统均很小，几乎不具研究价值；（3）利用所建分析方法，测试了桂枝汤解热有效成分桂皮醛、桂皮酸、桂皮醇以及芍药苷对发热大鼠下丘脑PGE2→PGA2和15-PGDH 2条通路的影响，体内和体外结果均显示，四个成分均具有不同程度的促进PGE2灭活的作用，与解热药效呈正相关，提示促进PGE2的上述双通路灭活可能也是他们解热的作用机制之一。.上述研究结果对于改进传统15－PGDH测试体系，更深入全面的研究和评价脑组织PGE2灭活通路，深入研究PGE2→PGA2反应机制甚至发现鉴定催化酶并尝试新的药靶研究均提供实验依据，具有较好的实用和理论双重意义。