Uncv无毛小鼠相关模型的建立及EGF/EGFR信号通路对毛囊发育调控机理的研究

Uncv BALB/C无毛小鼠是本课题组育成的一种自发突变模型，在毛囊发育学研究中具有较高价值。前期研究证实其EGF/EGFR通路存在障碍，本项目在此基础上建立三种EGF/EGFR通路障碍模型：无毛鼠近交系模型、毛囊干细胞特异性敲除egfr基因模型和毛囊乳头细胞特异性敲除egfr基因模型。以无毛鼠的稀毛、全毛和无毛三种表型为研究对象，分析EGF/EGFR通路相关分子在毛囊发育中表达的异同；以敲除egfr基因的模型鼠为基础，分析EGF/EGFR通路对毛囊干细胞、乳头细胞以及毛囊形态、结构的影响，并用蛋白质组学技术分析egfr基因敲除前后皮肤蛋白质表达的变化，深入了解该通路在毛囊发育中的调控机理；利用蛋白质组学技术分析Uncv无毛和全毛鼠皮肤蛋白的差异，验证EGF/EGFR通路存在的障碍，分析Uncv无毛鼠无毛性状产生的原因。上述模型的建立和相关研究可为人的脱发、斑秃等毛发疾病研究提供依据。

利用本课题组育成的自发突变模型Uncv BALB/C无毛小鼠，建立Uncv无毛小鼠近交系种群、建立Versican-Cre 转基因小鼠和Uncv基因敲除小鼠，研究Uncv小鼠无毛性状产生机制。.1，建立了Uncv BALB/C 无毛小鼠近交系，在原有群体中选择10对无毛纯合子小鼠按平行法近交繁殖，经选择淘汰，现保留4支，目前已近交繁殖12代，4支线小鼠均表型稳定、繁殖性状良好；2, 建立了两种毛囊乳头细胞特异表达Cre重组酶的转基因小鼠；建立一种毛囊干细胞特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠；引进一种毛囊干细胞诱导性、特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠；这些模型的建立为毛囊干细胞和乳头细胞特异性基因敲除提供了重要工具。3，UNCV小鼠皮肤毛囊从出生后3天开始变细变短，毛囊增殖数较对照小鼠明显降低；UNCV（iRhom2）基因表达高峰与毛囊生长期高度重合；定位显示iRhom2表达于毛囊的外根鞘、内根鞘和毛干；利用分子标记物K14、K6、AE15和AE13标记，发现UNCV小鼠毛囊内根鞘和毛干分化缺陷；对调节毛囊内根鞘和毛干分化的信号通路进行检测，发现Lef1，Notch1信号受到抑制，而BMP和EGF信号通路没有改变。说明UNCV突变导致TACE活化受到抑制，导致notch1不能剪切活化以Lef1的表达降低，从而导致UNCV小鼠毛囊内根鞘和毛干分化障碍，小鼠产生了无毛表型。4，利用表皮基底层、棘层、颗粒层分子标记物K14、K1、Involucrin、Loricrin对表皮的分化进行了分析，发现表皮各层都明显增厚，并且UNCV小鼠表皮基底层的角质细胞增殖明显较对照小鼠增多；染色显示UNCV小鼠皮脂腺较对照小鼠明显肥大，并且UNCV小鼠皮脂腺细胞增殖明显较对照小鼠增多；研究发现UNCV小鼠毛囊周期循环正常，提示毛囊干细胞的活化正常；利用毛囊干细胞的分子标记物K15、CD34、integrin α6、Sox9、Lhx2对毛囊干细胞进行了标记，发现UNCV小鼠毛囊干细胞数目没有改变。说明UNCV突变导致小鼠毛囊干细胞向表皮和皮脂腺分化增多，向毛囊分化减少，毛囊干细胞的数目和活化未受影响。还完成了Uncv无毛小鼠基因突变的确认、皮肤组织病理学分析以及Uncv基因对毛囊发育信号通路的影响，为今后深入研究毛囊发育提供重要基础。.发表论文8篇，培养研究生8名。