猪传染性胃肠炎病毒与免疫识别信号RIG-I互作机制研究

Transmissible gastroenteritis virus (TGEV) may cause transmissible gastroenteritis (TGE), which is one of major diseases threatening pig husbandry. At present, immune mechansims of TGE is still unclear. The current study focuses on the interplay between TGEV and RIG-I mediated innate antiviral immunity. Impact of TGEV infection on RIG-I pathway and regulation of overexpression of RIG-I on such infection will be investigated by real-time PCR, Western-blot etc. Escape mechanisms of TGEV from RIG-I mediated antiviral responses will be analyzed by site-directed mutagenesis and virus rescue. This study is helpful to elucidate the infection mechanisms of TGEV, identify potential targets against TGEV and develop noval anti-TGEV vaccines.

猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）感染引起的猪传染性胃肠炎（TGE）是危害养猪业的主要疫病之一，给世界养猪业带来了巨大的经济损失。目前，对于TGEV的免疫致病机制仍不清楚。本项目以TGEV与RIG-I介导的天然抗病毒免疫信号通路为研究对象，利用实时荧光定量RT-PCR、Western-blot等技术分析TGEV感染对RIG-I信号通路的影响机制以及RIG-I过表达对TGEV感染调控。通过基因突变、病毒拯救等技术分析TGEV逃逸RIG-I信号通路介导的天然抗病毒反应的机制。本研究可为进一步揭示该病毒的致病机理，鉴定抗TGEV药物的新靶标以及新型疫苗的开发奠定基础。

猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）感染引起的猪传染性胃肠炎（TGE）是危害养猪业的主要疫病之一，给世界养猪业带来了巨大的经济损失。目前，对于TGEV的免疫致病机制仍不清楚。本试验采用了猪小肠黏膜上皮细胞作为细胞感染模型，经过10代次连续培养后可观察到典型细胞病变，PCR和间接免疫荧光反应可以观察到明显阳性反应。以猪外周血单核细胞总RNA作模板扩增猪RIG-I基因，并构建成功pMD18-RIG-I和pVAX1-RIG-I阳性质粒。利用PCR反应检测TGEV感染IEC后RIG-I和IFN-α/β的动态变化表明，TGEV感染IEC后RIG-I和IFN-α/β未见明显变化，但NF-κB的表达水平分泌明显增高。TGEV感染IEC细胞后36 h和48 h能显著激活NF-κB，分别为对照组的5.16倍和5.91倍，说明TGEV激活NF-κB且与病毒复制有关，并随着TGEV接种剂量的增加NF-κB活性越强。Western blot和间接免疫荧光检测表明TGEV感染IEC后能显著上调P65的表达水平并发生核内转移。TLRs的SiRNA干扰实验发现，沉默TLR3和TLR4后，TGEV病毒刺激产生NF-κB的含量明显减小并呈现极显著差异，而在沉默TLR2，TLR8和TLR9后，病毒刺激不能影响NF-κB的改变。沉默MyD88或者TRIF的明显减少TGEV感染细胞产生的NF-κB含量，以上结果说明，TGEV是通过依赖于MyD88和TRIF信号接头分子的TLR3和TLR4信号传导途径激活NF-κB。本研究可为进一步揭示该病毒的致病机理，鉴定抗TGEV药物的新靶标以及新型疫苗的开发奠定基础。