转基因表达HBV抗原特异性细胞毒T淋巴细胞受体的研究

研究目的：克隆HBV抗原特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）的T细胞受体（TCR）编码基因，通过转基因表达大量产生HBV抗原特异性CTL，进而在细胞水平研究特异性CTL的作用效果与分子机制，为临床应用以特异性CTL为基础的免疫疗法治疗慢性乙型肝炎提供支持。研究内容和方法 ：1、从HLA-A2阳性急性乙肝恢复期患者外周血中诱导、分选、克隆和扩增HBV抗原特异性CTL；2、提取细胞RNA，用RT-PCR和5'-RACE等方法获取TCR的alpha和beta链编码基因；3、构建TCR重组逆转录病毒，介导特异性TCR在HLA-A2阳性人CD8 T淋巴细胞上表达；4、用HLA-A2+原代人肝细胞感染HBV作为靶细胞，与重组表达特异性TCR的CTL作用，通过检测靶细胞病毒活性及细胞损伤评价特异性CTL的作用效果；通过检测与靶细胞作用中效应分子表达及阻断效应分子作用，研究特异性CTL作用的分子机制。