E2F-1通过调控ADAM12表达促进小细胞肺癌浸润转移机制的研究

Small cell lung cancer (SCLC) is the most malignancy tumor in differential pathological lung cancers. With highly invasive characteristic, the five-year survival rate is only 3%. Our previous research showed that E2F1 highly presented in 95.7% SCLC, and the positive expression of ADAM12 was 97.8% in SCLC.When depletion of E2F1 by siRAN targeting E2F1, the expression of ADAM12 was significantly decreased. So, we speculated that E2F1 might participate in the invasion and metastasis by regulating the expression of ADAM12 in SCLC. In present research, the luciferase expression vectors containing the promoter of ADAM12 and the mutant vectors of E2F1 binding sites will be constructed, then transfected into cells and the luciferase activity will be detected. The mechanism of E2F1 regulatting the expression of ADAM12 will be explored. Meanwhile, H1688 cells in which the differential transcripts of ADAM12 will be silenced and H345 cells in which the differential transcripts of ADAM12 will be stable expressed will be constructed. Then the invasion and metastasis of differential group cells will be observed in vivo and in vitro, and the funcion of differential transcripts of ADAM12 will be explored in the process of invasion and metastasis of SCLC. The mechanism of E2F1 participatting in invasion and metastasis by regualting the expression of ADAM12 will be revealed in our prsent research, and our ultimate goal is to provide the experimental basis for clarifying the mechanism about invasion and metastasis of SCLC.

小细胞肺癌(SCLC)是肺癌中恶性程度最高的肿瘤，具有早期广泛远处转移的生物学特性,五年生存率仅为3%。本课题组前期研究表明:E2F1在95.7%的SCLC组织中高表达；ADAM12在97.8%的SCLC组织中高表达；干扰E2F1基因表达后, ADAM12表达降低较为显著；推测E2F1有可能通过调控ADAM12的表达参与SCLC浸润转移过程。本研究拟构建含有ADAM12启动子序列及E2F1结合序列突变的荧光素酶表达载体，检测荧光素酶活性，探讨E2F1调控ADAM12表达的分子机制；拟构建沉默ADAM12不同转录本的H1688细胞和稳定表达ADAM12不同转录本的H345细胞，通过体内外实验，观察不同细胞的浸润转移能力，探讨ADAM12不同转录本在SCLC浸润转移中的作用。本课题拟揭示E2F1通过调控ADAM12表达参与SCLC浸润转移的分子机制，为SCLC浸润转移机制的研究提供实验依据。

肺癌是世界上发病率和致死率最高的肿瘤之一。根据病理类型，肺癌被分为非小细胞肺癌和小细胞肺癌，前者约占肺癌总数的80%左右，小细胞肺癌约占20%左右，而且随着环境污染的加重，小细胞肺癌的发病率有逐年上升的趋势。小细胞肺癌以早期就发生全身广泛远处转移为主要特点，中位生存率7-12个月，两年生存率不足10%，五年生存率不足2%，因此探讨小细胞肺癌早期就发生广泛远处转移的分子机制，对提高小细胞肺癌患者的五年生存率至关重要。本研究发现转录因子E2F1在90%以上的小细胞肺癌组织标本中表达较高；干扰E2F1基因表达后，小细胞肺癌细胞的侵袭转移能力显著降低，提示转录因子E2F1有可能参与小细胞肺癌的浸润转移。本课题主要研究成果如下：.第一、应用ChIP-to-seq的方法，系统探讨了转录因子E2F1在小细胞肺癌中调控的靶基因，全面分析了E2F家族成员中E2F1、E2F4和E2F6调控靶基因的差异，阐明了E2F1在小细胞肺癌中调控靶基因的结合模序。.第二、本项目系统的研究了去整合素基质金属蛋白酶（ADAMs）和基质金属蛋白酶(MMPs)家族成员在小细胞肺癌中的表达，发现ADAM-12可以作为小细胞肺癌早期诊断和评价预后的一个指标；而且ADAM-12-L能够促进小细胞肺癌的增殖，而ADAM-12-S促进小细胞肺癌的浸润转移。.第三、本项目深入研究了E2F1调控ADAM12、MMP16、MMP9和MMP7表达的分子机制，揭示了E2F1调控这些基因表达的DNA结合序列，并对这些序列的功能进行了研究，阐明了E2F1调控这些基因表达的顺式作用元件。.第四、本项目探讨了E2F1在小细胞肺癌上皮细胞间质化（EMT）过程中的作用，发现E2F1通过调控Sip1的表达，进而促进小细胞肺癌EMT的过程。.本研究揭示了E2F1参与SCLC早期浸润转移可能的分子机制,为SCLC浸润转移机制的研究提供了实验依据。