循环纤维细胞通过TSP1抑制创面血管新生及机理研究

血管新生参与了慢性创面、肿瘤、风湿病等疾病。目前血管新生机理研究局限于分子对血管新生的调控作用，而以这些分子为靶点的药物在全身应用治疗血管新生相关疾病时会引起严重不良反应，因而临床迫切需要进一步研究细胞对血管新生的调控作用以寻找新的药物作用靶点。课题组前期工作显示：循环纤维细胞（PBFCs）在体外可以促进血管内皮细胞（VECs）凋亡并抑制其增殖；PBFCs在体内可以抑制创面血管新生；基因芯片结果提示PBFCs通过凝血酶敏感蛋白1（TSP1）发挥上述作用。本项目拟在前期工作基础上，构建TSP1和TSP1 shRNA腺病毒，采用免疫荧光染色、Western-blot、Real-time PCR等方法，明确PBFCs抑制血管新生的作用，并观察TSP1在PBFCs抑制血管新生中的作用及其信号转导机制。本课题有望进一步阐明血管新生的机理，为治疗慢性创面、肿瘤等血管新生相关疾病提供新的药物作用靶点。

血管新生参与了慢性创面、肿瘤、风湿病等疾病。目前血管新生机理研究局限于分子对血管新生的调控作用，而以这些分子为靶点的药物在全身应用治疗血管新生相关疾病时会引起严重不良反应，因而临床迫切需要进一步研究细胞对血管新生的调控作用以寻找新的药物作用靶点。课题组前期工作显示：循环纤维细胞（CFs）在体外可以抑制血管内皮细胞（VECs）增殖；CFs在体内可以抑制创面血管新生；基因芯片结果提示CFs通过凝血酶敏感蛋白1（THBS1）发挥上述作用。..本项目拟在前期工作基础上进行如下研究：进一步明确CFs抑制VECs增殖的作用，并观察CFs是否抑制VECs迁移；明确CFs抑制VECs增殖是否与THBS1有关；研究CFs抑制VECs增殖的信号通路，重点观察THBS1下游信号转导通路及控制VECs增殖的信号转导通路的改变；明确CFs抑制体内创面血管新生是否与THBS1有关。..项目组的研究显示：将CFs移植入受体小鼠外周血后，CFs可以迁移到受体小鼠创面肉芽组织内，并明显移植创面愈合过程中的血管新生；CFs移植还可以抑制受体小鼠Matrigel模型的血管新生；将CFs与VECs在Transwell内共培养时，CFs可促进VECs形成条索样结构，并抑制VEGF和FGF2诱导的VECs细胞增殖；将CFs与VECs在三维胶原内共培养时，CFs可以明显抑制VECs管腔形成。这些结果提示：CFs可以在体内及体外抑制VECs细胞增殖及血管新生。CFs不仅可以抑制VECs细胞增殖，还能抑制VECs细胞凋亡。CFs与VECs在Transwell内共培养时，CFs可抑制VECs细胞凋亡；而将CFs与VECs在三维胶原内共培养时，CFs可以阻断生长因子撤除后引起的VECs管的消退。CFs抑制VECs细胞增殖部分与THBS1有关。将CFs与VECs在Transwell内共培养后，CFs内的THBS1明显增高，将CFs细胞内的THBS1采用RNAi技术降低后可以部分阻断CFs对VECs细胞增殖的抑制作用，并可以部分逆转CFs对小鼠创面愈合模型及Matrigel模型内血管新生的抑制作用。..本项目的研究进一步阐明了血管新生的机理，并可为治疗血管新生相关疾病如肿瘤、风湿和增生性瘢痕的疾病提供新的药物作用靶点和治疗思路。