激肽释放酶-激肽系统活化Kupffer细胞介导三氯乙烯免疫性肝损伤及机制研究

Trichloroethylene(TCE)-induced liver injury is one of the main cause of death in Dermatitis Medicamentosa-like of Trichloroethylene (DMLT), and it is one of the major issue need to be resolved in multiple organ injury. However, the immune-mediated liver injury cannot be fully explained by IV allergic reaction. This research is based on the previous study of liver injury, bradykinin(BK) and its receptor B1R and B2R expression increasing in TCE-sensitized mice. In present study, we use B1R and/or B2R gene knockout mice, observe kallikrein-kinin system (KKS) activation product BK combination with its receptor B1R and B2R activating MAPK signaling pathway, mediate Kupffer cell secreting inflammatory factors changes, participate in immune liver injury process in TCE sensitized mice. Meanwhile we cultured 3d sensitized group mice Kupffer cells, treatment with different doses of des-Arg9-BK and BK with or without B1R and B2R inhibitors and MAPK pathway antagonists in vitro, to detect the expression of MAPK signaling pathway and inflammatory factors changes of Kupffer cells. The study aimed to explore the mechanism of the activation of KKS system in TCE-induced immune liver injury, enrich the pathogenesis of immune liver injury and provide novel ideas for the prevention and treatment of liver damage in DMLT.

三氯乙烯（TCE）致免疫性肝脏损伤是TCE药疹样皮炎（DMLT）致死的主要原因之一，也是其致多脏器损伤中亟需解决的一大课题，仅用Ⅳ型变态反应不能完全解释其病理机制。本研究在前期观察TCE致敏小鼠肝脏损伤及体内缓激肽BK及其受体B1R和B2R表达改变的基础上，拟使用B1R和/或B2R基因敲除小鼠，通过观察TCE致敏小鼠体内激肽释放酶-激肽系统（KKS）活化产物BK与其受体B1R和B2R结合激活MAPK信号通路，介导Kupffer细胞炎性因子分泌改变，参与免疫性肝脏损伤过程，同时结合体外分离培养3d组致敏小鼠Kupffer细胞，经不同剂量des-Arg9-BK和BK处理后，在用或不用B1R和B2R抑制剂及MAPK通路拮抗剂情况下，检测Kupffer细胞MAPK信号通路转导及炎性因子表达改变情况，初步探讨KKS系统激活在TCE免疫性肝脏损伤中的作用机制，本研究将为DMLT的肝脏损伤防治提供新思路

近年来，三氯乙烯（TCE）职业接触已成为我国工人健康危害的突出问题，TCE药疹样皮炎（DMLT）患者以皮疹和肝功能损伤为主要临床表现，肝功能衰竭为死亡的重要原因之一，探讨DMLT患者严重的免疫性肝损伤机制有着重要意义。激肽释放酶-激肽系统（KKS）是一个复杂的内源性多酶系统，参与调控多种脏器等的生理功能，与肝病、肾病、炎症反应等疾病的发生有着密切关系。本研究通过建立TCE经皮致敏小鼠模型，使用KKS系统活化特异性拮抗剂PKSI-527，发现KKS系统在TCE致敏小鼠体内活化，BK及其受体在TCE致敏小鼠体内表达明显升高，使用PKSI-527后，BK及其受体表达水平降低，表明TCE致敏小鼠体内存在KKS系统活化现象；再通过使用B1R和B2R特异性拮抗剂R715和HOE140，我们发现使用R715和HOE140后，经病理学、超微结构和生化检测，TCE致敏小鼠肝脏损伤明显改善，表明BK及其受体在TCE致免疫性肝脏损伤中发挥重要作用，进一步检测发现，TCE致敏小鼠肝脏MAPK信号通路，PI3K/Akt信号通路和STAT3信号通路等介导炎症反应的信号分子出现不同程度的改变，且其介导的细胞因子在肝脏组织的表达也明显升高，使用R715和HOE140后，ERK1/2、JNK、Akt和STAT3等磷酸化蛋白的表达明显改善，且相应炎性因子表达也明显降低，表明BK及其受体可能通过调控MAPK、PI3K/Akt和STAT3信号通路促进炎性因子释放介导TCE致免疫性肝脏损伤；此外，TCE致敏小鼠肝脏中CD68和CD16/CD32表达明显升高，表明TCE致免疫性肝损伤过程伴有Kupffer细胞活化，通过体外分离培养Kupffer细胞，检测Kupffer细胞MAPK信号通路介导其分泌炎性因子改变情况，发现TCE致敏小鼠Kupfer细胞 P38、ERK1/2、JNK的磷酸化蛋白信号分子及其介导的炎性因子表达明显升高，抑制BK受体可降低其表达，表明Kupffer细胞活化是TCE致免疫性肝脏损伤中的关键节点。本项目阐明了TCE致敏小鼠肝脏损伤过程中BK及其受体B1R和B2R结合调控Kupffer细胞活化并释放炎性因子的信号通路激活机制，为DMLT的肝脏损伤防治提供新思路。