葡萄籽原花青素基于miR-133/TGF-β1通路干预前列腺纤维化的抗BPH作用机制研究

Benign prostatic hyperplasia (BPH) is a chronic disease in older men with a high prevalence. BPH induced lower urinary tract symptoms (LUTS) have serious impacts on patients′ quality of life. Recent studies have shown that prostate fibrosis (PF) is an important reason for BPH-LUTS. Moreover, our previous study found that grape seed proanthocyanidins (GSP) are able to significantly attenuate the tissue fibrosis, restore the miR-133 level and suppress the TGF-β1 over expression in rats, but the specific mechanism is unclear. Using both in vivo and in vitro model, the current study aims to reveal the dose-effect relationship of GSP by detecting the prostate hyperplasia and fibrosis level after the administration of GSP, and to find the active ingredients through the microdialysis-HPLC-MS/MS techniques. The study will also clarify the targeted-regulating role of miR-133 on TGF-β1 by dual-luciferase assay, as well as the anti-PF role and mechanism of miR-133/TGF-β1 signaling pathway in the ameliorative effects of GSP on BPH using the miR-133 inhibitors and analog intervention. This research project will not only lay a foundation for exploring the new anti-BPH-LUTS drug, but also provide new insights in the prevention and treatment of BPH-LUTS.

良性前列腺增生（BPH）是老年男性常见慢性疾病，其引起的下尿路症状（LUTS）严重影响男性的生活质量。新近研究发现前列腺纤维化（PF）可能是导致BPH-LUTS的重要原因。申请者前期研究发现葡萄籽原花青素（GSP）具有减轻PF病变、恢复miR-133水平和抑制TGF-β1过表达的生物活性，但具体作用机制尚不明确。本项目拟在动物和细胞水平上，通过GSP给药干预后检测前列腺增生和纤维化水平，结合微透析-HPLC-MS/MS联用技术检测靶器官内成分，揭示GSP的剂量-药效关系和可能的活性物质基础。并采用双荧光素酶法诠释miR-133对TGF-β1的靶向调控，以及通过miR-133抑制剂和模拟物干预，阐明GSP通过miR-133/TGF-β1通路干预PF的防治BPH作用及作用机制。本项目为发现新型防治BPH-LUTS药物奠定基础并为BPH-LUTS的防治提供新思路。

良性前列腺增生（BPH）是老年男性常见慢性疾病，其引起的下尿路症状（LUTS）严重影响男性的生活质量。新近研究发现前列腺纤维化（PF）可能是导致BPH-LUTS的重要原因。申请者前期研究发现葡萄籽原花青素（GSP）具有减轻PF病变、恢复miR-133水平和抑制TGF-β1过表达的生物活性，但具体作用机制尚不明确。本项目建立了睾酮诱导的RWPE-1细胞增生模型，给予GSP及单体化合物干预，评价出剂量-时间-效应关系，并在细胞模型中筛选出活性化合物EGCG。建立丙酸睾酮诱导去势大鼠的BPH模型，并给予活性化合物EGCG干预，对模型组、正常对照组和EGCG组进行微小RNA（microRNA, miRNA）的高通量筛选，通过差异化表达、GO功能和pathway的富集分析初步揭示了EGCG调控的miRNA分子通路及其潜在的生物学功能。EGCG可以显著提高miRNA-1247-5p, miRNA-181a-1-3p, miRNA-133b-3p和miRNA-483-3p的水平，降低miRNA-92b-3p和miRNA-184。并且EGCG明显抑制纤维化标志物波形蛋白、α-SMA和Col-I的表达，以及使其mRNA水平下降。这些研究表明，EGCG可能通过调节miRNA的差异表达来调控肌动蛋白细胞骨架、细胞外基质和粘附性等生物过程，最终影响BPH的纤维化进程。BPH纤维化相关miRNA的靶基因以及基因之间的相互关系还有待进一步考察，本项目为发现新型防治BPH-LUTS药物奠定基础并为BPH-LUTS的防治提供新思路。