高尔基相关蛋白GOLPH2/GP73调节CD44V6内吞促进肝癌转移

肝癌高表达高尔基相关蛋白GOLPH2/GP73是肝癌重要诊断和预后标志物，但机制不明。前期研究发现恶性潜能高的肝癌细胞高表达GP73，慢病毒介导RNA干扰沉默GP73表达后肝癌细胞增殖、抗失巢凋亡及侵袭能力减弱。构建FLAG-GP73过表达体系，SDS-PAGE分离后银染质谱分析，CO-IP结果提示GP73和Dynamin2相互作用。初步结果提示GP73可能参与调节CD44V6内吞和细胞内循环。鉴于CD44V6为具有内吞效应的膜蛋白信号分子，与Src激酶的密切联系，进一步通过研究GP73、CD44V6、Rab5、Rab11空间定位和相互关系，分析CD44V6在细胞膜上表达量动态变化及下游关键分子的活性和细胞生物学特性改变，深入研究GP73调节CD44V6内吞循环及Src激酶等转移相关的关键信号分子活性，及对肝癌转移的影响，力争明确GP73促进肝癌转移的机制和对Src激酶抑制剂的敏感性。

GOLPH2/GP73是高尔基复合体膜相关蛋白，近年来发现肝癌组织表达显著增高。最初的研究发现其作为肝癌的标志物，诊断肝癌有较高的敏感性和特异度。但晚近发现，该分子与肝癌的恶性生物学行为（如转移潜能）以及肝癌的预后有密切关系。然而，GOLPH2在肝癌发生、发展过程的作用却不明确。本课题在前期的研究基础上，探索了GOLPH2调节肝癌细胞膜分子CD44分子内吞循环的作用，以及对相关信号途径的影响以及临床意义。研究发现，GOLPH2可提高肝癌转移潜能，而这种作用与CD44有密切关系。通过提取透明质酸刺激后不同时间点膜蛋白CD44丰度，以及免疫荧光、免疫共定位的方法，发现GOLPH2主要促进了CD44分子的内吞后再循环，提高肝癌细胞膜CD44的丰度，其作用机理是抑制了CD44分子内吞后形成的内涵体向晚期内涵体的转化，从而减少了CD44分子内吞后晚期内涵体-溶酶体的降解。然而，CD44分子在肝癌细胞中的内吞过程不依赖动力蛋白dynamin2的作用，后者可通过其他信号分子如EGFR，调节MAPK而影响肝癌的转移潜能。在176例构建的肝癌组织芯片上，通过免疫组织化学染色检测了GOLPH2和CD44的表达，结果显示，高表达GOLPH2及CD44分子的肝癌患者预后显著较低表达者差，其中位生存期分别38.70±2.86月vs 51.79±3.5月（p<0.001）和37.07±2.97月vs 50.70±3.99月（p=0.002）。本课题首次明确了GOLPH2可通过调节CD44分子内吞循环，抑制CD44分子降解，进而促进肝癌的转移，为干预肝癌转移提供新的治疗靶点，建立临床前期的理论基础。