胸腺髓质上皮细胞调控Treg细胞发育分化与重症肌无力相关性及益气解毒复方干预研究

Myasthenia Gravis（MG）is an autoimmune disease. Its incidence and thymus and immune system disorders are closely related, but it still remains unclear how thymus triggers MG. Regulatory T cell (Treg cell) are a key factor in the pathogenesis of MG, which grow, differentiate and be mature finally in thymus, might play an important role in the pathogenic process of MG. Since medullary thymic epithelial cells（mTECs）serve as a main role in constituting thymic microenvironment, it is supposed that mTECs plays an important factors influencing the growth and differentiation of Treg cells. Then whether mTECs cells affect the development and differentiation of Treg cells is the key mechanism of MG formation? There is still a lack of research. Through previous research, we found out that Yiqijiedu Compound may alleviate the clinical symptoms of MG patients, and regulate the lymphocyte subsets distribution, yet how therapeutic target works is still not well understood. In this review, we intend to establish the model of Experimental Autoimmune Myasthenia Gravis(EAMG) based on our previous research, and the thymus organ will be cultured in vitro, then therapeutic thymus excision will be conducted, through which to explore how the mTECs influence the changes of Treg cells in number and function aspect.and to clarify the intervention effect of Yiqijiedu Compound.Finally to reveal the therapeutic target of Yiqijiedu Compound, thus provide theoretical and experimental basis in the treatment of myasthenia gravis and the developmental research of Yiqijiedu Compound.

重症肌无力（MG）是一种自身免疫性疾病，其发病与胸腺和免疫系统失常密切相关，但对胸腺如何引发MG尚不清楚。Treg细胞是影响MG发病的关键要素，其在胸腺中发育、分化和成熟，胸腺髓质上皮细胞（mTECs）是胸腺微环境的主要成分，故推测mTECs为影响Treg细胞发育分化的重要因素。然MG是否存在胸腺mTECs细胞形态或功能的异常，后者影响Treg细胞发育分化是否是MG形成的关键机制？目前尚缺乏研究。课题组前期研究发现，益气解毒复方可改善MG患者的临床症状，调节T淋巴细胞亚群比例水平，其作用靶点可能与免疫调节有关。故在已有的研究基础上，通过EAMG大鼠模型、体外胸腺培养和治疗性胸腺切除术患者，探讨mTECs细胞对Treg细胞数量和功能变化的影响及与MG的相关性，以及益气解毒复方的干预作用，揭示胸腺在MG发病中免疫调节机制及益气解毒复方的干预靶点，为MG的治疗和该方的开发研究提供理论及实验依据。

本研究首先提出“五脏亏虚，因虚生毒，毒损胸腺”是MG的发病基础,补脾、扶阳、解毒、散结为MG治疗大法，并对益气解毒复方（以下简称“该方”）进行临床观察。在实验研究中，本课题通过观察MG患者mTECs与胸腺Treg形态结构与数量变化关系，结果显示MG患者胸腺组织中T细胞相关因子呈异常表达，提示T细胞相关因子间的表达异常是MG发病的重要原因。进一步体外培养MG患者的mTECs及外周血Treg，结果显示（1）该方能促进MG患者增生性胸腺培养的mTECs和Treg的增殖，并上调Foxp3、Aire、RANK蛋白及 TGF-β等的表达，可干预Treg的增殖和功能表达，这可能是药物对MG治疗的直接原因；（2）在与mTECs共培养的Treg中，该方能促进Treg的增殖并上调Foxp3基因、CTLA-4等蛋白的表达，提示mTECs能够调控Treg的增殖和功能的表达。基于此再探索EAMG大鼠mTECs与Treg形态及数量变化的相关性，结果显示（1）EAMG大鼠mTECs的Aire与Treg的Foxp3的表达呈正相关关系；（2）EAMG大鼠外周血Foxp3+Treg、CTLA-4+T细胞百分比下降，IL-10表达增多。最后，通过体外培养EAMG大鼠mTECs，观察mTECs异常对Treg及其细胞因子产生的影响，结果显示（1）该方能促进EAMG大鼠Treg的增殖并抑制其凋亡，能上调Foxp3基因、CTLA-4、CD25蛋白及TGF-β等的表达，提示该药物能直接干预Treg的增殖、凋亡及功能表达，这可能是药物对EAMG治疗的直重要原因；（2）跟独立培养Treg相比，与mTECs共培养的Treg中，该方上调Foxp3基因、CD25等蛋白的表达，提示mTECs能够调控Treg的增殖、凋亡和功能的表达，说明该方对Treg的干预，还可以通过对mTECs的治疗作用产生，这可能是该方对EAMG治疗作用的机制所在。综上所述，MG发生发展可能与mTECs及Treg功能的相互作用、相互影响密切相关，mTECs能够调控Treg的增殖和功能的表达，该方可调节mTECs功能，进而促使Treg分化发育，调节相关炎性细胞因子和蛋白的表达，这可能是其治疗MG的重要机制。本研究为该方的进一步研究提供了理论和实验依据。通过本课题研究培养人才15人，其中教师7人，硕士研究生8人，完成科研学术论文18篇，硕士毕业论文5篇。