芎芪有效成分配伍调节MMP/TIMP平衡系统预防大鼠急性脑梗塞溶栓后出血转化作用研究

Intracranial artery stenting and thrombolysis in treatment and prevention of acute cerebral infarction is the most effective treatment, but released in 2011 by the SAMMPRIS findings shows, active drug therapy in the treatment of symptomatic intracranial arterial stenosis of the superior drug plus angioplasty and intracranial stent placement, the most important reason is that the stent group of symptomatic cerebral hemorrhage rate far hinger than the medical-therapy group, which reminds people active in the prevention of intracranial large artery stenosis causing cerebral infarction at the same time, active prevention of hemorrhagic transformation is still not to be ignored. We think that thrombolytic therapy for acute cerebral infarction of hemorrhagic transformation of removing blood stasis caused by blood disease, its essence belongs to blood stasis due to Qi deficiency, and unsmoothness of vessels. As a result of leukocyte adhesion invasion, the activation of MMPs, MMP / TIMP system disorders, cerebral vascular basement membrane degradation, destruction of BBB causing hemorrhagic transformation, and the benefits of gasification stasis prescription can regulate the MMP / TIMP system balance, prevention of hemorrhagic transformation.This paper observed Ligustici and Astragali Active Ingredient on thrombolytic brain hemorrhage and blood brain barrier permeability, by immunohistochemistry, Western Blot, enzyme method, PCR method from molecular, cell layer to quantitative analysis the MMP / TIMP system, explore the combination of traditional Chinese and Western medicine treatment of cerebral infarction by new ideas.

颅内动脉支架及溶栓是预防和治疗急性脑梗塞最有效的方法，但2011年公布的SAMMPRIS研究结果却显示，积极药物疗法治疗症状性颅内动脉狭窄优于药物加颅内支架置入术，其主要原因就是支架组症状性脑出血发生率远高于内科治疗组，这提醒人们在积极预防颅内大动脉严重狭窄导致脑梗塞的同时，积极预防出血转化仍不可忽视。我们认为急性脑梗死溶栓治疗出现的出血转化属于破血逐瘀造成的血脉病变，其本质属于气虚血瘀，血脉不利，脉道不固。由于白细胞粘附侵润，MMPs的激活，MMP/TIMP系统失调，脑血管基底膜降解，BBB破坏从而引起出血转化，而益气化瘀方药能调节MMP/TIMP系统平衡，预防出血转化。本课题观察芎芪有效成分配伍对溶栓后脑出血量及血脑屏障通透性的影响，通过免疫组化、Western Blot、酶谱法、PCR等方法从分子、细胞等层面对MMP/TIMP系统指标的定量分析，探索中西医结合治疗脑梗塞的新思路。

超早期溶栓治疗是唯一有循证医学证据的治疗方法，但缺血再灌注的同时，亦可导致多种严重并发症，如出血转化等，从而严重限制了溶栓治疗在临床的应用。急性脑梗死溶栓治疗出现的出血转化属于破血逐瘀造成的血脉病变，其主要病机为气血虚瘀,针对这一病机我们提出应用具有益气活血效用的黄芪注射液及川芎嗪注射液组合的“芎芪合剂”，预防溶栓后出血转化的发生。结果表明，该方能通过血脑屏障，保护溶栓后血管内皮细胞紧密连接的完整性、减少炎症细胞-中性粒细胞的聚集，从而减少急性脑梗塞大鼠溶栓后出血转化，并提出其作用机制可能是通过调控ECM代谢及炎症细胞的浸润调控系统MMP/TIMPs，发挥对血脑屏障的保护作用，维持颅内内环境的稳定性。研究发现，在溶栓治疗的各时间点(3h、6h、24h)中，溶栓组、川芎组、黄芪组、芎芪合剂组颅内MMP-2 、MMP-9、TIMP-1蛋白表达及mRNA表达与假手术组相比均具有显著性差异（P＜0.05），中药干预组能明显降低颅内MMP-2 、MMP-9蛋白及及mRNA表达且与溶栓组比较差异具有统计学意义（P＜0.05），芎芪合剂组较单药组在各个时间点均能明显降低颅内MMP-2 、MMP-9蛋白及及mRNA表达且与溶栓组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）；各组颅内髓化过氧化物酶检测未发现明显差异性，外周血中性粒细胞内蛋白含量低，检测无结果，对外周血血清检测发现溶栓治疗各个时间点(3h、6h、24h)溶栓组、川芎组、黄芪组、芎芪合剂组MMP-2 、MMP-9、TIMP-1蛋白表达及mRNA表达与假手术组相比均具有显著性差异（P＜0.05），中药干预组MMP-2 、MMP-9蛋白及及mRNA表达且与溶栓组比较差异具有统计学意义（P＜0.05），芎芪合剂组较单药组MMP-2 、MMP-9蛋白及及mRNA表达且与溶栓组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）；MMP-2 、MMP-9、TIMP-1为分泌蛋白，芎芪合剂能有效降低其分泌，维持血脑屏障的稳定性。