猪胚胎骨骼肌shRNA文库构建并用于骨骼肌生长分化相关新基因的发掘

分离猪骨骼肌生长分化相关新基因是深入研究肌肉发育生物学机理和挖掘猪产肉性状候选基因的需要。本项目在已构建的猪胚胎骨骼肌cDNA文库基础上，应用II类限制性内切酶Mme I进行酶切、连接，将其转变为由大量不同siRNA表达载体所组成的shRNA文库。继而依反向遗传学思路，以鼠肌母细胞系C2C12为对象进行大规模RNAi分析，通过细胞表型及标志基因MyoD、Myogenin在mRNA、蛋白质水平上表达量变化的检测，筛选出具有影响骨骼肌生长分化作用的siRNA。运用生物信息学手段分析，追溯出涵盖这些已具功能siRNA的相关基因。以无同源序列siRNA为探针，从原cDNA文库中获取其基因cDNA全长。本项目的研究成果，将为猪骨骼肌重要发育阶段分子调控机理的深入研究和猪产肉性状候选基因的挖掘提供基础，亦为大规模进行基因功能研究和功能基因筛选提供技术平台，因而具有重要的学术价值和应用前景。