C5L2基因稀有突变的检测及其与冠心病的相关性研究

In our former study, We identified that prevalence of coronary heart disease is different in different ethnic groups in Xinjiang. The distribution of C5L2 gene polymorphism are also vary. C5L2 gene polymorphism is associated with triglyceride synthesis , glucose transporter and elevated ASP, Disorders of lipoprotein metabolism and high level plasma ASP concentration are considered to be important risk factors in the pathogenesis of CAD. Accordingly, we screened for possible mutations and polymorphisms of the C5L2 gene and assessed the association between the genotypes of this gene and CAD in different ethic population. In the present study, we intends to use high-throughput TaqMan genotyping Technology to analysis the relationship between C5L2 gene polymorphism and coronary heart disease in different ethnic groups in Xinjiang; then use the technology of Western blot and immunocytochemistry to research the C5L2 gene expression in peripheral blood monouclear cells from the coronary heart disease. silenced with the RNA interference method, use the DNA microarray technology to detect the silenced gene expression frofiling change Based on cell to research the biological of ASP Identify the related gene changes of C5L2. Reveal C5L2 gene heterogeneity and possible molecular mechanisms of coronary heart disease incidence in different ethnic groups in Xinjiang, a period of individualized diagnosis and gene therapy.Reveal the heterogeneity and possible molecular mechanisms between coronary heart disease incidence and C5L2 gene in different ethnic groups in Xinjiang, in order to provide individualized diagnosis and gene therapy in coronary heart disease。

课题组前期研究发现，新疆不同民族冠心病的患病率不同，C5L2基因多态性分布亦有差异，C5L2基因多态性与甘油三酯合成和葡萄糖转运及ASP升高有关，冠心病患者脂质代谢紊乱发生率高，血浆 ASP 浓度水平升高，因此推测C5L2基因可能和新疆不同民族冠心病的发生及其异质性质存在关联。本课题拟利用高通量TaqMan基因分型技术分析C5L2基因多态性和新疆不同民族冠心病的关系及其差异；然后用Western blot及免疫细胞化学方法研究C5L2基因在冠心病患者及对照者外周血单核细胞中的表达情况及在细胞基础上C5L2结合ASP的生物学活性。再利用RNA干涉技术沉默冠心病患者外周血单核中的C5L2基因，DNA微阵列技术检测C5L2基因沉默后在细胞中表达谱的变化，找出与C5L2基因相关的基因变化，揭示C5L2基因在新疆不同民族冠心病发病异质性中的作用及可能分子机制，以期为个体化诊断和基因治疗提供依据。

本项目在前期研究的基础上，利用高通量TaqMan基因分型技术分析C5L2基因多态性和新疆不同民族冠心病的关系及其差异；然后在细胞模型及组织标本中验证其功能。整个研究过程分为三个部分，第一部分为筛选C5L2基因在不同民族冠心病中的新的突变位点，第二部分是基于人群的病例对照研究，分析新的突变位点与标签SNP和新疆维汉民族冠心病的关联。第三部分是在细胞水平验证其功能。研究结果如下：.（1）我们通过直接测序法在新疆维吾尔族和汉族冠心病患者C5L2基因第二外显子区检测到两个新的突变位点分别是744C＞A和597G＞A，597G＞A的基因型在新疆维吾尔族人群和汉族人群冠心病中分布存在差异性。在新疆维吾尔族人群冠心病组突变AG 基因型明显高于对照组，与冠心病具有相关性，维吾尔族携带AG 型者发生冠心病的风险增加。.（2）我们通过病例-对照研究发现C5L2基因标签SNP位点rs2972607 位点基因型在维汉民族对照组中的分布差异显著，在汉族和维吾尔族人群中rs2972607 显性模型与冠心病具有相关性，AA 基因型携带者患冠心病的风险增加，是冠心病发病的危险因素；对于rs8112962 这个位点的显性模型在汉族人群中与冠心病的发病具有相关性，TT 基因型携带者使汉族人群患冠心病的风险增加，而在维吾尔族人群中未发现此位点与冠心病具有相关性。.（3）基因功能研究发现，用Western blot及免疫化学方法研究C5L2基因在人皮肤成纤维细胞中的表达情况，通过pAcGFP1-C5L2转染人皮肤成纤维细胞后,C5L2及ASP蛋白的表达明显增强。另外，转染后甘油三酯水平明显上升，突变体和野生型比较TG升高更加明显，但差异无统计学意义（P>0.05）。通过该项目的实施，发表SCI论文4篇，核心期刊2篇，申报发明专利1项目，获得省部级科技奖励1项，培养博士研究生1名，硕士研究生2名。