宫颈癌放疗敏感性microRNA预测模型的建立及调节机制研究

宫颈癌是女性第二位最常见的妇科恶性肿瘤，放疗是宫颈癌治疗的主要手段之一，放疗抵抗是宫颈癌复发的主要原因，约有30%宫颈癌患者因此复发。放疗敏感性预测决定了宫颈患者治疗的个体化选择，成为提高宫颈癌患者生存率的关键。本课题在既往我们研究宫颈癌放疗敏感性相关蛋白EMMPRIN的基础上，深入探究宫颈癌放疗敏感相关蛋白的调节机制，miRNA作为人类mRNA表达调节机制，新近备受关注。采用芯片技术检测放疗敏感与放疗抵抗的宫颈癌组织及细胞株中miRNA表达谱的差异，从而筛选出与放疗敏感相关的miRNA，建立能预测宫颈癌放疗敏感性的预测模型。并用相关miRNA转染宫颈癌细胞，及用转染细胞种植于裸鼠，观察细胞及种植肿瘤放疗敏感性变化，筛选出放疗敏感相关miRNA作为指导患者个体化治疗和靶向生物治疗提供依据，并且推测和验证miRNA影响放疗敏感性的机制，为可能的基因治疗提供理论依据。

宫颈癌是女性第三位最常见的妇科恶性肿瘤，放疗是宫颈癌治疗的主要手段之一，放疗抵抗是宫颈癌复发的主要原因，约有30%宫颈癌患者因此导致复发。放疗敏感性预测决定了宫颈患者治疗的个体化选择，成为提高宫颈癌患者生存率的关键。本课题假设miRNA能调节宫颈癌放疗敏感性，使用miRNA芯片筛选出不同放疗敏感性的宫颈癌的miRNA的表达。Real-time PCR验证miRNA芯片筛选的结果。选择放疗不敏感的宫颈癌细胞SiHa，放疗敏感的宫颈癌细胞Me180作为课题研究的细胞。克隆形成实验检测放疗敏感性。用慢病毒载体构建稳定转染miR－181a的稳转株，体外体内实验验证稳定转染株的放疗敏感性。增殖实验，周期实验，凋亡实验检测miR－181a调节放疗敏感性的可能机制。mRNA芯片和生物信息软件预测miRNA可能的靶基因。双荧光素酶实验验证靶基因。Real－time PCR， western blotting，克隆形成实验验证靶基因的表达和功能。miRNA芯片技术筛选11例放疗敏感和7例放疗抵抗的宫颈癌标本中的miRNA表达谱，筛选出与放疗敏感相关的miRNA。结果我们筛选出8个与放疗敏感相关的miRNA。挑选miRNA-181a作为我们研究的对象。过表达miR-181a能抑制宫颈癌细胞的放疗敏感性，低表达miR-181a能促进宫颈癌细胞的放疗敏感性。我们建立表达miR-181a的稳定转染株种植于裸鼠，体内实验验证miR-181a能抑制宫颈癌细胞的放疗敏感性。通过mRNA芯片技术和生物信息软件我们预测miR-181a的作用靶基因，PRKCD成为可能的靶基因。过表达miR-181a能抑制宫颈癌细胞的PRKCD的表达，而低表达miR-181a能增加宫颈癌细胞的PRKCD的表达。抑制宫颈癌细胞PRKCD的表达能抑制宫颈癌细胞的放疗敏感性，并且促进宫颈癌细胞的PRKCD的表达能增加宫颈癌细胞的放疗敏感性。恢复高表达miR-181a的宫颈癌细胞株中的PRKCD的表达能逆转miR－181a对宫颈癌细胞株对放疗抵抗作用。我们认为miR－181a能通过抑制靶基因PRKCD的表达来抑制宫颈癌的放疗敏感性。