冬青苦丁茶多酚类物质抗肥胖作用及其机理的研究

多酚类化合物是植物中普遍存在的次级代谢产物，研究表明其具有很强的控制肥胖的作用。苦丁茶是一种我国特有的传统药用植物，具有显著的抗氧化、降脂、降血压、增强心血管功能等生理活性。但目前还没有直接、系统的有关冬青苦丁茶多酚类物质抗肥胖功效的动物实验以及抗肥胖机理的研究报道。基于我们对冬青苦丁茶多酚类物质的分离纯化与结构解析、抗氧化活性以及对胰脂肪酶与alpha-淀粉酶的抑制活性的前期研究基础，本项目拟采用高脂膳食诱导的肥胖小鼠为动物实验模型，探讨冬青苦丁茶水提物、单咖啡酰基奎宁酸混合物及二咖啡酰基奎宁酸混合物的抗肥胖生理功效；在动物实验研究的基础上，拟从对胰脂肪酶、alpha-淀粉酶以及脂肪酸合酶等酶的抑制作用、对3T3-L1前体脂肪细胞活力、增殖分化的影响与诱导凋亡的作用以及对成熟脂肪细胞中甘油三酯的脂解作用等方面探讨冬青苦丁茶中主要多酚类物质的抗肥胖功效作用机理。

多酚类化合物是植物中普遍存在的次级代谢产物，研究表明它们能有效地清除体内过剩的自由基、抑制脂质过氧化以及控制肥胖的作用。苦丁茶是一种我国特有的传统药用植物，具有显著的抗氧化、降脂、降血压功能等生理活性。本项目开展了冬青苦丁茶中主要多酚类物质的抗肥胖功效及作用机理的研究，主要研究结果如下：.（1）从冬青苦丁茶中分离纯化出6种咖啡酰奎宁酸（CQA）类物质（3-CQA、4-CQA、5-CQA、3,4-diCQA、3,5-diCQA和4,5-diCQA），建立了一种快速检测和分析苦丁茶中CQA类物质的HPLC方法，具有稳定性高、重复性好的优点，并有望用于不同种类苦丁茶的初步鉴定。.（2）动物实验结果表明，与肥胖模型组相比较冬青苦丁茶多酚类物质可以有效地降低肥胖大鼠体重、Lee’s指数、肝重、附睾脂肪系数，抗肥胖作用明显，其机理可能通过降低血脂、抗氧化作用、抑制体内LPS活性等起到抗肥胖作用。.（3）冬青苦丁茶CQA物质对α-葡萄糖苷酶、胰脂肪酶、α-淀粉酶均具有显著的抑制活性，而且双取代咖啡酰基奎宁酸的抑酶活性均高于单取代咖啡酰基奎宁酸，说明CQA中的咖啡酰基对其活性贡献较大，揭示了CQA与抑制消化酶活性之间的构效关系。.（4）多光谱学（紫外吸收光谱、荧光淬灭、同步荧光及其圆二色谱等）分析揭示了CQA类物质与消化酶蛋白之间的结合机理，特别是圆二色谱分析结果表明CQA与酶结合后，改变了蛋白的二级结构，并最终影响了酶的催化活性，降低碳水化合物等在体内的消化与吸收，从而达到抗肥胖的功效。.（5）冬青苦丁茶CQA类物质能够与牛血清白蛋白及β-乳球蛋白相互结合，而且结合主要通过疏水相互作用自发进行。此研究为阐明CQA与蛋白之间的作用机制，了解CQA在生命体内的存储和运输情况等提供了重要信息。.（6）冬青苦丁茶CQA类物质对3T3-L1前体脂肪增殖与分化有显著的抑制作用，而且显现一定的量效关系和时效关系，细胞分化产生的甘油三酯的相对含量随着CQA物质的浓度增加而降低，进一步说明CQA物质对3T3-L1前体脂肪细胞的分化有抑制作用。.（7）体外发酵实验结果表明，苦丁茶冬青苦丁茶提取物及多酚可以改变肠道菌群结构和调节微生物代谢，具有一定的益生效果，其作用机制及其与抗肥胖的关系有待进一步研究。