HOX通路着床相关分子在IVF不同促排方案胚胎着床中的作用探索

How to enhance embryonic implantation rates of IVF have always been a difficult problem for the reproductive experts，which represents the bottle - neck to restrict the enhancement of ART pregnancy rates. We have explored the mechanism of HOXA10 and cofactors regulating embryonic implantation in the early studies. Our project aim to research the relationship between the new proved genes target genes and embryonic implantation in IVF ovarian stimulation cycles, further clarify the HOX downstream paths by EMSA and Luciferase Reporter Gene Assay, and confirm the function of these target genes in embryonic implantation by gene transfection and siRNA techniques, so as to demonstrate the differences between each ovarian stimulation protocols in the level of endometrium, explore the special molecular marker of endometrial receptivity which could be used in clinic. The identification of these marker genes related to embryonic implantation could lay the foundations for gene therapy, which contribute to increase IVF achievement ratio and promote the development of ART.

如何提高胚胎着床率是困扰生殖专家们的世界性难题，为限制辅助生殖技术成功的瓶颈问题。我们的青年基金研究对HOX通路在胚胎着床中的作用进行初步探索，发现了13种可能参与胚胎着床的HOX通路下游基因。本项目拟以临床上最具代表性的几种IVF促排方案为主线，通过探索新发现的HOX通路分子与胚胎着床的关系，寻找可能影响IVF胚胎着床的关键性基因，并采用RNA干扰技术和宫腔内脂质体转染模型以进一步验证靶基因功能，旨在破译HOX通路调控胚胎着床的分子机制、探索可运用于临床的、最具代表性的子宫内膜容受性特殊标志物；另一方面，本项目通过比较不同的IVF促排方案对胚胎着床及子宫内膜容受性特殊标记物表达的影响，从而从内膜水平进一步明确不同促排方案之间的差异，为临床上IVF促排方案的选择提供有力的证据支持。这项工作除了IVF超促排卵对内膜容受性的影响提供新的认识外,特殊标志物的识别还能为新的靶基因治疗技术提供可能.

如何提高胚胎着床率是困扰生殖专家们的世界性难题，为限制辅助生殖技术成功的瓶颈。我们项目组前期通过对HOX通路在胚胎着床中的作用进行初步探索，发现了13种可能参与胚胎着床的HOX通路下游基因。为进一步明确13种筛选的下游基因在胚胎着床中的作用，本项目组通过实时定量PCR、免疫印迹检测这13种靶分子在月经周期不同时段子宫内膜的表达及变化规律，发现这13种待选基因中以Alx4, Kdm3a, Klf17, Smo这4种基因在胚胎着床期子宫内膜的表达水平显著增高。为明确这4种着床相关下游基因是否受HOXA10及其辅因子Meis1、Pbx1的直接调控，我们通过生物信息学结合位点分析、染色体免疫沉淀（CHIP）、RNA干扰技术、子宫内膜细胞联合转染试验及双荧光素酶报告基因验证,新发现并证实Alx4，Kdm3a，Smo基因为受HOXA10直接调控的下游基因。另一方面，通过探索HOX通路胚胎着床标志性基因与IVF超促排卵的关系，从子宫内膜水平明确不同IVF促排方案之间的差异，我们选取卵巢正常反应者,通过检测HOX通路着床标记性分子在不同IVF促排方案中的表达情况，发现不论采用何种促排方案，着床标记分子HOXA10,MEIS1,ILF在促排周期的表达均显著低于非促排自然周期。通过对比着床标记分子在不同促排方案中的表达差异，发现改良长效长方案其着床标记分子的表达高于拮抗剂方案及长方案，与临床RCT研究结果相符；从而从临床及分子水平证实改良长效长方案具有更好的子宫内膜容受性,为临床上IVF促排方案的选择提供有力的证据支持。