蛋白激酶Mirk在骨肉瘤中功能的相关研究

我们在前期研究中发现蛋白激酶Mirk在骨肉瘤生长及存活中发挥关键作用。本课题拟对Mirk在骨肉瘤中的功能作进一步研究。一方面在正常成骨细胞内高表达Mirk，了解Mirk是否能促进成骨细胞分化及增值，甚至向肿瘤细胞转化。另一方面在骨肉瘤细胞细胞内抑制Mirk表达，了解Mirk被抑制后，是否通过下调肿瘤细胞存活及抗凋亡基因，诱导骨肉瘤细胞的凋亡。我们还通过抑制骨肉瘤动物模型内Mirk表达，了解抑制Mirk能否下调肿瘤内存活及抗凋亡基因并抑制肿瘤生长。该课题研究可进一步阐明蛋白激酶Mirk在骨肉瘤发生及生长中的作用，为蛋白激酶Mirk作为骨肉瘤分子靶向治疗靶点提供更充足的依据。

我们构建了Mirk 表达载体pIRES/Mirk，将pIRES/Mirk转染人成骨细胞，使成骨细胞稳定表达Mirk蛋白。我们发现Mirk蛋白在成骨细胞高表达后可以促进成骨细胞增殖。而高表达Mirk蛋白的成骨细胞在琼脂培养基上可形成克隆，说明Mirk蛋白可诱导成骨细胞向肿瘤细胞转化。我们构建了针对蛋白激酶Mirk的四环素诱导型shRNA慢病毒表达载体。将Mirk四环素诱导型shRNA慢病毒表达载体转染骨肉瘤细胞U-2OS和 KHOS，应用四环素诱导Mirk shRNA表达从而抑制Mirk的表达，我们发现Mirk表达被抑制后，细胞内凋亡相关蛋白MCL-1，BcL-XL，Survivin表达被抑制，而骨肉瘤细胞调亡明显增加。我们将转染四环素诱导型shRNA慢病毒表达载体转染骨肉瘤细胞U2-OS及KHOS植入裸鼠皮下，建立骨肉瘤动物模型。应用四环素诱导肿瘤组织内针对蛋白激酶Mirk的shRNA表达，抑制肿瘤组织内Mirk的表达。我们发现用药4周后，肿瘤较对照组明显缩小，说明通过抑制肿瘤细胞内蛋白激酶Mirk的表达，可以抑制肿瘤生长。。我们的研究显示，Mirk蛋白在骨肉瘤的发生及生长中发挥重要作用，Mirk蛋白在正常成骨细胞中高表达使成骨细胞有向肿瘤细胞转化的倾向。而通过抑制骨肉瘤细胞内Mirk蛋白得表达，可以促进骨肉瘤细胞的凋亡，抑制肿瘤生长。因此Mirk蛋白可以成为骨肉瘤分子靶向治疗的潜在靶点。本课题已发表SCI论文1篇，相关资料还在进一步整理，可望发表SCI论文5篇。本课题培养博士生1名，硕士生3名。