探索增溶辅料对中药注射剂杂蛋白测定方法的影响

Statistics and analysis on adverse reactions of traditional Chinese medicine injections showed that impure proteins which may exist are key factors affecting injection security. Thus, establishing a sensitive and accurate method to measure impure proteins is becoming an urgent challenges of quality control in traditional Chinese medicine. surfactants ,as solubilizing excipients, are widely used in traditional Chinese medicine injections.for example ,Tween-80,a commonly used surfactant,interfere with the accuracy and sensitivity of existing analytical methods,causing false-positive interference, or rendering the analyte undetectable. In a preliminary study,Our research group has established a two-step gel chromatography, and applied successfully to test for impure proteins in Qing kai Ling injection, which is not added solubilizer .The project aim to explore the influence of solubilizer on the analytical method ,and provide scientific support for efficacy and safety.Initially,the project will measure HPLC fingerprint chromatogram of solubilization adjuvant ,which are often used in Chinese medicinal injections; verify and confirm the molecular structure of macromolecular compounds (that may be present)using LC-MS in tandem with LC-NMR technologies; identify and reduce security risks introduced by the solubilizer.Also,this project will study the influence of solubilization adjuvant upon elution profile of symbolic protein-lysozyme and Bovine Serum Albumin, as a model for measuring guiding impure proteins in current varieties of traditional Chinese medicine injections; eventually improve the current two-step Gel chromatography; establish methods and schemes to measure impure proteins in all Chinese medicine injections;ensure the efficacy and safety of injections used in traditional Chinese medicine.

对中药注射剂不良反应的统计与分析表明，其中可能存在的杂质蛋白是影响其安全性的关键因素。因此建立杂质蛋白灵敏、准确的检测方法成为中药质量控制急需解决的难题之一。吐温-80等表面活性剂作为增溶辅料在中药注射剂中广泛应用，其使用干扰现有方法的准确和灵敏，引起假阳性或造成漏检。前期研究建立了两步凝胶色谱法，成功检测了未添加增溶剂的清开灵注射液中的杂蛋白。本项目旨在探索增溶剂的影响，为合理、安全使用增溶剂提供科学支撑。首先测定中药注射剂中常用增溶性辅料的色谱指纹图谱，结合LC-MS、LC-NMR技术对其中可能存在的高分子物质进行检定和结构确认，减少由增溶剂引入的安全隐患；其次通过浓度-保留模式研究增溶性辅料对标志性蛋白及中药指标性成分流出曲线的影响，并指导现有注射剂品种杂蛋白的测定，最终完善现有两步凝胶色谱法，建立适用于所有中药注射剂中杂质蛋白的测定方法或方案，为中药注射剂的安全使用提供保障。

对中药注射剂不良反应的统计与分析表明，其中可能存在的杂质蛋白是影响其安全性的关键因素。因此建立杂质蛋白灵敏、准确的检测方法成为中药质量控制急需解决的难题之一。吐温-80 等表面活性剂作为增溶辅料在中药注射剂中广泛应用，其使用干扰现有方法的准确和灵敏，引起假阳性或造成漏检。本项目包括以下几方面研究内容，建立吐温-80中的5种挥发性杂质同时测定的方法；考察了灭菌温度对吐温-80稳定性的影响；利用气质联用色谱法检测吐温-80中的未知挥发性成分；差示扫描量热法对吐温-80进行快速检测；对不同批次吐温-80样品中的7种脂肪酸进行测定；利用药典磺基水杨酸比浊法及两步凝胶法对市面上常见的20种共42个批次的中药注射剂中的杂质蛋白进行检测；分别考察了吐温-80浓度对磺基水杨酸比浊法和两步凝胶法的影响。本项目建立的同时检测吐温-80中5种杂质性成分的气相色谱方法检测限低，精密度及重复性好，可以用于吐温-80的质量控制。灭菌实验表明100℃为较安全的灭菌温度。气质联用色谱法检测吐温-80中除了乙二醇、二甘醇等已知杂质外，还检测到了其他聚合产物及长链脂肪酸类物质，特别是甘醇类。磺基水杨酸比浊法可耐受吐温-80的浓度为0.5%，吐温80对该方法的影响较大。而两步凝胶法对吐温-80的耐受浓度为6.0%。建议可在中药注射剂中吐温-80浓度较低（<0.5%）时，采用磺基水杨酸比浊法；在吐温-80浓度较高（0.5~6.0%）时，采用更为准确的两步凝胶法。本项目建立了同时检测吐温-80中5种挥发性成分的气相色谱方法，进一步明确了中药注射剂中常用辅料吐温-80中的成分，对吐温-80商品的质量控制提供了参考。此外，本项目明确了吐温-80浓度对两步凝胶法检测中药注射剂中杂质蛋白的影响，该方法具有稳定性好、重复性高、结果可靠、且不受人员及仪器影响等优点，对中药注射剂的质量控制研究具有重要指导意义，同时为中药注射剂的合理安全使用提供了科学依据。