肝细胞表面猪戊型肝炎病毒候选受体的筛选和鉴定

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus，HEV)引起的一种主要经粪-口途径传播的人兽共患病，人临床上超过50%的急性肝炎为HEV所致。HEV可以跨种间感染与传播，给人类健康和畜牧业生产造成巨大危害，并构成潜在的公共卫生问题。研究HEV靶细胞受体特点，对阐明HEV在人与动物、动物与动物之间跨种间感染与传播机制极为重要。本研究拟通过酵母双杂交技术（Sos蛋白招募系统），采用人肝cDNA 文库，筛选人肝细胞表面与猪HEV相互作用蛋白基因，生物信息学方法分析获得候选受体基因，同时克隆猪的同源基因。构建目的基因表达载体，表达纯化相关蛋白。通过免疫组织/细胞化学方法、免疫共沉淀、病毒阻断试验等验证候选受体。并对人与猪的相关候选受体进行分析比较。结果将为揭示猪HEV跨种间感染及其与宿主（细胞）间的相互作用分子机制提供理论依据，并为研制HEV疫苗、药物和诊断试剂提供借鉴。

HEV可以跨种间感染与传播，给人类健康和畜牧业生产造成巨大危害，并构成潜在的公共卫生问题。研究HEV与靶细胞受体特点，对阐明HEV在人与动物、动物与动物之间跨种间感染与传播机制极为重要。主要研究内容和结果如下：. （1）酵母双杂交法筛选肝细胞中与HEV相互作用蛋白: 研究选取了可形成HEV病毒样颗粒的ORF2编码的p239蛋白为诱饵蛋白，运用SOS招募蛋白酵母双杂交系统，筛选其在人肝脏cDNA文库内的互作蛋白。结果显示，筛选到2个互作蛋白，分别是细胞色素Homo sapiens cytochrome P450，family2，subfamily C，polypeptide 8 (CYP4502C8)，transcript variant Hp1-1以及视黄醇结合蛋白4（RBP4）。视黄醇结合蛋白4是肝细胞分泌的重要功能性分子，负责视黄醇的转移。多个研究表明该分子和丙型肝炎有着重要联系。与戊型肝炎的相关研究尚无报道，系本研究首次发现。. （2）肝cDNA文库中与HEV pORF3互作蛋白的筛选:　HEV ORF3 编码一个磷酸化蛋白，但是在HEV感染宿主细胞中行使的具体的功能尚不明确，研究利用CytoTrap酵母双杂交系统，以pORF3作为诱饵蛋白，在人肝cDNA表达文库中筛选与HEV pORF3相互作用蛋白。结果从肝cDNA表达文库中筛选到了“补体成分3”10个与HEV pORF3相互作用蛋白，为进一步研究pORF3在HEV感染宿主细胞中的功能奠定了一定的基础。. （3）利用VOPBA技术鉴定了猪胃、十二指肠、肺、肝脏、肠系膜淋巴结、肾脏及脾脏组织细胞表面HEV候选受体。