基于不同饲养环境中流感小鼠肠道菌群及Th/Treg平衡的变化研究湿性粘滞的本质

The evil of dampness is one of the most common causes of exogenous diseases in Chinese medicine. According to the theory of traditional Chinese medicine, Dampness can cause stickness, which means long duration or repeated episodes of diseases and the like. Currently scholars mainly study the natures of "wet-stickness" through the immunity and the changes of gastrointestinal function, but for its nature, why dampness could cause the tenacity of disease, why does it make excretion sticky and etc, they have not done further research. Based on the results of preliminary study, this project intends to investigate the nature of the "wet-stickness" from the following three aspects: ① By comparing the changes of the number of intestinal flora: total anaerobic bacteria, Bifidobacterium, Lactobacillus, Enterococcus, Enterobacter, in normal mice and mice infected by flu FM1 raised in different artificial environments respectively, and compare the results with the other raising environments, we could clarify why clinical manifestations caused by the wet evil appeared more excretion disorder. ②To explore why wet evil could suppress the immune response and prolong the duration of disease by detecting the change of two sets of most important subsets of immune cells: Th1/Th2, Th17/Treg, and their mediated immune pathways .③ Through the systematic study of intestinal flora, the Th / Treg balance and their regulation of signaling pathways to explore the inner relationship of the two characteristics of "wet-stickness", so we can understand the scientific principles of "wet-stickness" systematically.

湿邪是中医最常见外感病因之一，中医认为湿性粘滞，其致病多有缠绵难愈，病程较长或反复发作等特点。目前学者们主要通过免疫，胃肠功能等变化研究湿性粘滞，而对其本质- - 湿邪为什么会使疾病缠绵难愈，为何会使排泄粘滞不爽等，未做出更深入研究。本项目欲在前期研究成果基础上，从下面三个方面深入探讨湿性粘滞本质。①通过检测湿环境下饲养的正常小鼠及FM1流感小鼠肠道厌氧总菌、双歧杆菌、乳酸杆菌、肠球菌和肠杆菌的变化，并与其它外邪饲养环境相比较，阐明为何湿邪致病临床表现多出现排出物滞涩不爽等症状。②通过检测维持机体免疫平衡最重要的两对T细胞亚群Th1/Th2和Th17/Treg的改变，以及它们所介导的免疫通路的变化来探讨为何湿邪会导致机体免疫功能被下调，疾病病程长，缠绵难愈。③通过研究肠道菌群失调与Th/Treg平衡及其调控的信号通路变化两者之间的关系来研究湿性粘滞两个特点的内在关联，依此系统探讨湿性粘滞本质。

湿邪是中医外感病因的“六淫”之一，其致病特点为疾病病程长，并且缠绵难愈。 随着全球气候变暖，因“湿”致病的疾病将会越来越多。在“湿邪”病机存在下， 机体清除病邪的能力下降，并可能使病情加重、病程延长，但其导致上述致病特点的具体机制还不清楚。为了深入阐明“湿性沾滞”的病机本质，本研究采用人工气候箱人为制造正常环境、常湿环境和湿热环境等不同的饲养环境，并采用流感病毒鼠肺适应株 FM1 病毒滴鼻建立小鼠流感模型，比较不同饲养环境中流感小鼠的一般生存状态，不同饲养环境中流感小鼠体内病毒复制情况，不同饲养环境的流感小鼠呼吸系统的微观病理改变，不同饲养环境 中流感小鼠体内免疫识别信号通路 TLR7和RLRs上下游免疫指标的改变，以期初步阐明“湿邪”致病特点的免疫学机制，以及中医“湿性粘滞”的科学原理及其本质。通过研究我们发现：病毒感染后，通过电镜和病理观察，湿邪饲养环境下 FM1小鼠呼吸道及肺损伤较为严重；通过基因和蛋白检测发现，接种流感病毒后机体免疫识别和免疫应答通路启动，其免疫通路明显上调，并且释放多种不同炎性因子；在常湿环境和湿热环境中FM1病毒感染的小鼠，与正常饲养环境中的流感小鼠相比，体内免疫识别TLR7信号通路被下调(TLR7、MyD88、IRAK-7和NF-κB)的mRNA及蛋白被下调。不同环境中饲养后，湿热组和寒湿组Th1/Th2、Th17/Treg比例较正常组比较无明显差异；病毒感染后，模型组小鼠脾脏Th1/Th2、Th17/Treg比例较正常组明显升高，而湿热模型组和寒湿感染组升高大于病毒模型组；病毒感染后，小鼠体内炎性因子较正常组明显上升，而寒湿环境中和湿热环境中感染的小鼠，其炎性因子上调不如正常环境中感染的小鼠高。抗体芯片数据显示，病毒感染后，湿热环境导致IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-12p70、IL-17、IFN-γ、IL-2Rα、IL-12p40、IL-23、IL-7、IL-15、IL-17E和IL-20表达量升高，IL-1ra、-6R和IL-21表达量降低，促使炎性反应向Th17和Th1介导的方向转变。上述结果说明湿邪环境下，机体免疫识别和免疫应答功能下降，产生干扰素能力降低，所以清除病毒能力降低，使疾病病程变长，同时病毒复制能力加强，症状加重；上述结果可能是“湿性沾滞”致病特点的免疫学机制。