阿尔茨海默病中抗Aβ自身抗体的功能及机制研究

It is unclear about the level and function of auto-Aβ antibodies.We found the auto-Aβ antibodies in AD patients could promote Aβ production. We also found the auto-Aβ antibodies againt N-terminal in AD patients could promote Aβ production by promoting APP β-secretase cut and inhibiting APPα-secretase cut.The auto-Aβ antibodies in healthy population were mainly against Aβ middle and C-terminal,with the function of inhibiting abeta aggregation and neurotoxicity.Our hypothesis:Autoimmue reactions promote the occurrence and development of AD. The autoantibody levels and Aβ epitopes change in AD patients could promote Aβ overproduction. The project intends to detect and compare levels and Aβ epitope distributions of auto-Aβ antibodies in AD patients and healthy controls, and analysis the correlation with the AD disease( Aβ levels, cognitive function);Auto-Aβ autoantibodies were isolated from the blood of AD patients and healthy controls;Furthermore, we analysis the effect of different Aβ epitopes of auto-Aβ antibodies on the promotion of Aβ production,inhibition of Aβ aggregation and antagonism of Aβ neurotoxicity in vitro and vivo and exploure the mechanism of auto-Aβ antibodies promoting Aβ production.This project has an important scientific significance in revealing the effect and mechanism of autoimmune effect in the occurrence and development of AD.

AD患者中抗Aβ自身抗体的水平和功能变化尚不清楚。我们发现：AD患者抗.Aβ自身抗体具有促进神经元Aβ产生的作用；进一步发现AD患者抗Aβ-N端自身抗体通过促进APP的β酶切、抑制α酶切而促进Aβ产生。而健康人群自身抗体主要针对Aβ中段和C端，具有拮抗Aβ聚集和神经毒性的作用。我们提出假说，自身免疫促进AD的发生发展， AD患者的自身抗体水平和Aβ表位发生变化，促进Aβ过度产生。本项目拟检测和比较AD患者和健康对照抗Aβ自身抗体水平及Aβ抗原表位分布，并分析与AD病情（Aβ水平、认知功能等）的相关性；然后从AD患者和健康对照者血液中分离出抗Aβ自身抗体；进一步从离体和在体水平分析针对不同Aβ表位的抗Aβ自身抗体在促进Aβ产生、抑制Aβ聚集和拮抗.Aβ神经毒性的作用，并探讨抗Aβ自身抗体促进Aβ产生的机制。本项目对于揭示自身免疫在 AD发生发展中的作用和机制具有重要科学意义。

AD患者中抗Aβ自身抗体的水平和功能变化尚不清楚。我们发现AD患者抗Aβ自身抗体具有促进神经元Aβ产生的作用，而健康人群自身抗体主要针对Aβ中段和C端，具有拮抗Aβ聚集和神经毒性的作用。本项目检测和比较AD患者和健康对照抗Aβ自身抗体水平及Aβ抗原表位分布，并分析与AD病情（Aβ水平、认知功能等）的相关性；进一步从离体和在体水平分析针对不同Aβ表位的抗Aβ自身抗体在促进Aβ产生和拮抗Aβ神经毒性的作用，探讨抗Aβ自身抗体促进Aβ产生的机制。揭示自身免疫在 AD发生发展中的作用和机制。. 该项目主要的研究结果：1、完成了AD患者血清及脑脊液抗Aβ抗体总体水平的检测，结果显示AD患者血清和脑脊液抗Aβ抗体总体水平显著降低。抗Aβ抗体总体水平和MMSE明显相关。2、完成了AD患者血清和脑脊液抗Aβ抗体不同抗原表位水平的检测，结果显示AD患者血清和脑脊液各个不同抗原表位抗Aβ抗体水平显著降低，抗Aβ中段自身抗体水平降低最显著。3、完成了离体水平对Aβ自身抗体的抗原表位与功能的研究。（1）检测不同表位抗Aβ自身抗体是否与神经元细胞膜结合，结果显示各节段Aβ自身抗体均能与神经元结合，N 端NAbs-Aβ染色主要集中在细胞膜上，中段和C端抗体染色主要集中在胞浆内。（2）完成了不同表位抗Aβ自身抗体对神经毒性的研究，离体MTT试验研究不同表位NAbs-Aβ对Aβ神经毒性的拮抗作用，结果显示AA19-30、AA25-36细胞毒性最强。SY-5Y细胞系中加入不同表位抗体，观察对Aβ毒性的拮抗作用，结果显示中段抗体对Aβ毒性的拮抗作用最强。（3）完成了抗Aβ自身抗体在APP代谢中作用的研究，结果显示N端NAbs-Aβ抗体处理后sAPPα和a-CTF降低，β-CTF增高，sAPPα和a-CTF降低呈量效关系。4. 完成了在体水平对Aβ自身抗体的抗原表位与功能的研究。（1）不同表位NAbs-Aβ注射APP/PS1小鼠皮层，结果显示N端抗Aβ抗体显著促进神经元凋亡，中段抗体抑制神经元凋亡。（2）不同表位NAbs-Aβ对AD小鼠APP代谢的作用，结果显示NAbs-Aβ（Aβ13-24，Aβ19-30，Aβ25-36，Aβ31-42）处理后，Aβ产生没有变化，N端NAbs-Aβ（Aβ1-12、Aβ7-18）处理后，Aβ生成增加，提示N端NAbs-Aβ促进APP的β酶切。