局部基因诱导免疫耐受与局部用药防治异体复合组织移植急慢性排斥反应机制与应用研究

异体复合组织移植初步临床应用获得成功，展示了良好的应用前景，免疫抑制药物全身大剂量应用所致副作用是影响其推广应用的主要障碍。如何降低术后全身免疫抑制药物的使用剂量是亟需研究的问题。本课题拟利用复合组织位于体表、耐缺血时间长、移植之后三周与受区重建血运后蒂部血管可以阻断的特点，采用动物异体复合组织移植模型，使用供养血管灌注（包括术中体外灌注和术后局部血管灌注）、免疫抑制药物表面涂抺、药物磁性脂质体缓释微球灌注、微量泵局部持续灌注等局部给药方式，CTLA4Ig-OX40Ig和TIMP-1局部灌注基因转染诱导免疫耐受，防治急慢性排斥反应，探讨其作用机制，研究给药方式与方法，通过局部干预措施降低全身免疫抑制药物的用药量，从而减少药物副作用，降低医疗费用，为异体复合组织移植探索一种新的安全有效的免疫抑制治疗策略与方法，从而推动异体复合组织移植在临床上的广泛应用，提高严重毁容患者的整形修复效果。

异体复合组织移植初步临床应用获得成功，展示了良好的应用前景，免疫抑制药物全身大剂量应用所致的副作用是影响其推广的主要障碍。如何降低术后全身免疫抑制药物的使用剂量是亟需研究的问题。本课题组成功建立了以近交系大鼠为实验动物的半侧颜面异体复合组织移植模型；制备了免疫抑制剂缓释微球和磁性微球，为局部诱导免疫耐受探索新的给药方式；在大鼠异体复合组织移植模型上验证了局部基因治疗，细胞治疗，淋巴结干预诱导免疫耐受的作用和机制，研究结果如下：. 我们制备了雷帕霉素聚乳酸乙醇酸共聚物缓释微球，缓释微球外形及结构良好载药微球载药量及包封率均较高，我们还制备了两种不同粒径大小的雷帕霉素磁性微球作用于大鼠腹部皮瓣，结果表明非交联磁性载体在大鼠体内安全性好，并且在外加磁场的作用下能够在靶区富集。. 应用病毒介导的CTLA-4-Ig、OX40-Ig局部基因单独或联合应用于大鼠CTA。结果表明，体外病毒灌注的方法能使皮瓣获得目的基因的高表达，而在受体肝、肺内低表达；局部灌注Ad-CTAL4Ig或Ad-OX40Ig，能够延长移植皮瓣的存活时间。两种基因联合较单一基因治疗能够延长移植物存活时间。联合短程、小剂量免疫抑制剂雷帕霉素后，皮瓣存活时间较其他实验组大大延长。同时我们研究发现CTLA4Ig局部发挥作用与灌注皮瓣内IDO活性升高有关。. 我们对未成熟树突状细胞（imDC）局部回输治疗诱导同种异体复合组织移植耐受及机制进行了研究，结果提示局部应用imDCs后可能更快更直接地发挥免疫调节作用。而CXCR3、CXCR4表达降低提示，imDCs发挥调节免疫作用可能影响了免疫炎性细胞的招募，从而延缓急性排斥反应的发生。. 我们成功建立了大鼠异体复合组织移植淋巴引流隔绝模型,证实隔离淋巴引流能够抑制免疫排斥反应的发生，说明淋巴引流在排斥反应发生过程中起着重要作用，干预淋巴结可能能够诱导免疫耐受。. 我们研究还发现长时间的冷缺血不影响排斥反应的启动而是加速了反应性细胞的浸润。因此可以通过移植物局部处理，阻断由冷缺血损伤引起的趋化因子与其受体的作用，减轻移植排斥。. 我们的研究从多个角度探索了局部处理诱导免疫抑制的作用和机制，为异体复合组织移植在临床上的进一步应用提供了理论和实验基础。