HIF-1a对卵巢黄体发育过程中VEGF依赖性血管增生的调控机制

黄体是一种暂时性的分泌器官，在雌性生殖周期调控及早期妊娠的建立与维持中起重要作用。目前有关研究还仅停留在VEGF水平，但近年来转录因子HIF-1a的发现及其功能的研究将为这一领域揭开新的篇章。本项目以前期体外培养实验为基础，通过成年大鼠卵巢周期黄体发育模型和eCG-hCG诱导的未成熟大鼠假性妊娠黄体发育模型，利用药物处理及外源基因的瞬时表达，通过分子生物学手段从组织形态、卵巢功能、血管增生、蛋白定位、基因调控这五个层次上对信号通路新蛋白HIF-1a在黄体形成与发育过程中调控VEGF依赖性血管增生的作用机制进行深入细致的研究，旨在建立"生殖激素LH/hCG或缺氧-HIF-1a-VEGF-血管增生-黄体发育"这一遗传通路。我们的研究将为理解卵巢黄体形成与发育的分子机制提供新的实验数据和理论基础，揭示操纵黄体功能的临床意义，有助于开发新型的避孕措施及为治疗黄体相关的不孕症提供新策略。

在哺乳动物卵巢中，黄体是一种暂时性的分泌器官，在雌性生殖周期调控过程中起着重要的作用，是由破裂排卵后的卵泡所形成；同时也是血管增生比较激励的地方。早期黄体快速形成致密的毛细血管网可以确保产生激素的细胞获得氧气、营养和合成激素所必要的前体，同时释放大量的激素用于早期妊娠的建立和维持。由此可见，黄体早期的血管增生在黄体形成、发育及其功能具有非常重要的作用。目前的研究已表明VEGF在血管增生过程中具有非常重要的作用，但是其是如何参与黄体血管增生的分子调控机制仍不是很清楚。直到近年来有关转录因子HIF-1a的研究为其进一步提供了重要线索。黄体细胞体外培养试验结果表明在缺氧条件下HIF-1a直接参与调控VEGF的转录；进一步研究发现HIF-1a还直接参与生殖激素诱导VEGF表达的过程，但仍需要体内试验结果来证明HIF-1a在黄体形成及其功能调节中的作用。..首先，通过周期性黄体形成的动物模型对HIF-1a在卵巢细胞中的表达及其定位进行分析，发现HIF-1a主要在卵巢颗粒/黄体细胞中表达，这为下一步分子机制研究提供了重要的线索。为了研究HIF-1a信号通路在周期性黄体形成及其功能调控中的作用，本实验还通过HIF-1a小分子抑制剂Ech对实验动物进行处理，通过RT-PCR检测HIF-1a和VEGF mRNA的表达变化，通过蛋白印迹检测HIF-1a蛋白的表达变化，同时还通过EIA/RIA检测了血浆或卵巢中孕酮与雌激素的变化情况，最终阐明了HIF-1a可以通过调节卵巢细胞VEGF的表达参与卵巢功能的调节。其次，通过假性妊娠黄体形成的动物模型对HIF-1a 的作用进行了研究，实验方法同上，研究发现HIF-1a同样是通过调节VEGF的表达参与假性妊娠黄体的形成及其功能调节。最后，通过沉默HIF-1a对上述结果进行了验证。..本项目利用不同的动物模型以及现代生化与分子生物学技术，对HIF-1a信号通路在哺乳动物卵巢黄体发育过程中的调控作用进行了系统的研究，建立了卵巢HIF-1a信号通路与卵巢黄体功能之间的分子调控机制—HIF-1a/VEGF信号通路。这一研究成果将有助于我们进一步理解黄体功能不全的现象，揭示操纵黄体功能的临床意义；同时有助于提高人类不孕症的防治、避孕手段的开发、动物繁殖的调控和一些卵巢功能障碍的治疗等新措施。