尘螨Der Ⅱ融合蛋白靶向双功能纳米疫苗免疫治疗的实验研究

It is estimated more than 30 million asthmatic pateints in China; about 70%-80% patients are senaitized to dust mite among them.The antigen specific immunotherapy is the only specific therapeutic remedy for the treatment of asthma currently, which is recommended by WHO.The designed project plan to (1) generate a fusion protein of mite allergen, Der II. We will construct a nanometric vaccine containing the mite allergen, Der II, ISS-ODN and a fucose base; the latter can be specifically recognized by dendritic cells; thus, the vaccine can be specifically captured by dendric cells and to regulate the dendritic cells’ functions. We will also briefly characterize this new nanometric vaccine. (2) An asthmatic animal model will be developed to observe the (a) absorption and metabolism of the nanometric vaccine in the body; (b) therapeutic effect of the nanometric vaccine on the asthmatic animals; the effect of the nanometric vaccine on generation of toleragenic dendritic cells and regulatory T cells. (3)The signal transduction pathway will be also investigated. The expected results will provide new therapeutic method for the treatment of asthma and furhter understand the pathogenesis of the disorders caused by dust mite allergens.

在我国哮喘患者约3000万，其中70-80%对尘螨过敏；尘螨疫苗特异性免疫治疗（SIT）是WHO推荐的唯一对因治疗方法；但现有尘螨疫苗仍有许多不足之处。本课题在前期工作基础上①选用基因工程技术将屋尘螨和粉尘螨最主要Ⅱ类过敏原构建融合蛋白Der Ⅱ，制备新型PLGA-b-PEG纳米共聚物，以此为载体包裹具有免疫调节作用的ISS-ODN和Der Ⅱ融合蛋白；根据DC表面受体能特异性识别及结合末端含岩藻糖基载体的特性，以岩藻糖为靶向分子与上述尘螨融合蛋白纳米疫苗偶联，制成双功能尘螨Der Ⅱ靶向纳米疫苗，对该疫苗的性状和表征进行分析。②建立尘螨哮喘动物模型，观察：A、该疫苗在体内吸收和代谢；B、尘螨Der Ⅱ靶向纳米疫苗免疫治疗疗效的观察，重点是对DC和Treg的作用。③体外细胞实验进一步验证该疫苗对DC和Treg的作用及探讨其信号传导通路。该研究可望为尘螨过敏性疾病SIT提供新方法和新理论。

过敏性疾病是临床上的常见病和多发病，在众多的过敏原中，尘螨是最主要的过敏原，其阳性率约70-80%。尘螨过敏原疫苗特异性免疫治疗（SIT）是唯一对因治疗方法，但仍存在治疗疗程长、患者依从性差等不足之处，故研制出新型尘螨疫苗是该领域的研究热点。..本项目已完成预期任务目标：①成功克隆表达纯化出尘螨新组分过敏原Der f 21、25、27、28、29、31，并通过动物和细胞实验阐明尘螨新组分过敏原的致敏机制，研究显示尘螨过敏原可上调DC细胞表面共刺激分子（CD80、CD40），促使Th0向Th2偏移；同时可通过TLR2调节肺部上皮细胞TSLP、IL-33的表达，从而诱发过敏反应。②通过纳米聚合物合成技术，成功合成了4种新型纳米聚合物PLGA-b-PEG、PLGA、PLA-PEG及壳聚糖，且通过实验比较分析4种纳米材料的表征和功能，筛选出更适合做过敏原疫苗药物载体的聚合物为PLGA-b-PEG。③通过基因工程技术将尘螨两种主要过敏原Der f 1和Der p 2基因合成融合基因，并克隆、表达、纯化该融合蛋白Der Ⅱ及进行其免疫学鉴定，进一步通过纳米疫苗制备技术用PLGA-b-PEG纳米聚合物包载Der Ⅱ融合蛋白制备PLGA-b-PEG-Der Ⅱ靶向纳米疫苗；④通过哮喘、鼻炎和过敏性眼结膜炎等过敏性疾病动物模型和细胞实验，观察过敏原纳米疫苗PLGA-b-PEG-Der Ⅱ特异性免疫治疗（SIT）疗效和机制。结果显示纳米尘螨过敏原疫苗PLGA-b-PEG-Der Ⅱ能显著提高IL-10、TGF-β1等免疫耐受型细胞因子和Treg，从而达到提高过敏原SIT的疗效，降低免疫治疗的风险和缩短治疗疗程，为临床哮喘等过敏性疾病的SIT提供新方法和理论依据。