灭多威对MDEC-07114细胞的毒性作用及机理研究

The Methomyl caused the insect poisoning death through the suppression acetylcholin esterase activeness. Our earlier period experiment discovered the Methomyl to the MDEC-07114 cell toxic effect, and causes the cell cycle to hinder as well as the mitochondria pathological change.The cell cycle holdback is closely related cell apoptosis, the mitochondria involved the insect cell apoptosis. Whether,did the Methomyl inhibite the growth of MDEC-07114 by inducing cell apoptosis ? What were the mechanism? At present has not seen the report.There were differences of opinions about insect cell apoptosis. What research insect cell apoptosis mechanism may be provide a new way for insect control.The study of housefly cell apoptosis is rare.The mechanism is not clear.This study will explore the relativity about the methomyl killed cells and inducing cell apoptosis? Do methomyl induce cell apoptosis through mitochondrial pathway? Are other channels involved in cell apoptosis? The experiment will displayed the mechanism of induce apoptosis，and provide valuable data for in-depth understanding of the diversity of insect cell apoptosis.As well as ,it is looking a new target for the prevention of Musca domestica.

灭多威为神经毒性药物，主要通过抑制乙酰胆碱酯酶活性，而使昆虫中毒死亡。前期实验发现灭多威对MDEC-07114细胞有毒性作用，并引起细胞周期阻滞以及线粒体病变，提示灭多威毒性作用的多样性。细胞周期阻滞与凋亡密切相关，线粒体参与或涉及昆虫细胞凋亡，灭多威是否通过诱导细胞凋亡来抑制其生长？其诱导凋亡的机制如何？目前未见报道。昆虫细胞凋亡的研究是探讨昆虫杀虫剂作用机制、寻找昆虫防治新途径的探索和尝试，但昆虫细胞凋亡途径仍存在疑义。有关家蝇细胞凋亡研究罕见，机制也不清。本研究探讨灭多威对MDEC-07114细胞的抑杀作用是否与诱导细胞凋亡有关？灭多威诱导MDEC-07114细胞凋亡机制是否通过线粒体途径？其它途径是否参与凋亡的发生？从新的角度认识灭多威毒性作用机制；揭示MDEC-07114细胞凋亡调控机理，为深入认识昆虫细胞凋亡多样性提供有价值的资料。也为寻找家蝇防治的新靶点提供新思路。

灭多威为神经毒性药物，主要通过抑制乙酰胆碱酯酶活性，而使昆虫中毒死亡。前期实验发现灭多威对MDEC-07114 细胞有毒性作用，并引起细胞周期阻滞以及线粒体病变，提示灭多威毒性作用的多样性。细胞周期阻滞与凋亡密切相关，线粒体参与或涉及昆虫细胞凋亡，灭多威是否通过诱导细胞凋亡来抑制其生长？其诱导凋亡的机制如何？本实验利用灭多威作用于家蝇胚胎细胞系（MDEC-07114），HE染色法观察MDEC-07114细胞凋亡形态，并测定细胞凋亡指数；TUNEL检测MDEC-07114细胞凋亡；透射电镜观察不同浓度灭多威作用后MDEC-07114细胞的超微结构变化；罗丹明标记处理MDEC-07114细胞，流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的变化，以探讨灭多威诱导MDEC-07114细胞凋亡及机制。结果发现：1、不同浓度灭多威作用于MDEC-07114后，从2mg/ml组开始见典型凋亡细胞，细胞凋亡指数增加，且随浓度的递增而逐渐升高；2、TUNEL检测：2mg/ml组出现明显的绿色荧光，4mg/ml组有所增加，8mg/ml荧光最强；3、透射电镜观察：1mg/ml 组开始出现核染色质浓缩、边集。从2mg/ml组开始出现典型凋亡细胞形态，有大量的细胞核染色质浓缩、边集，胞浆内出现空泡，有线粒体肿胀、空化；4、流式细胞仪检测：2mg/ml灭多威作用于细胞后1小时，荧光强度开始减弱，荧光峰左移，线粒体膜电位下降，随着药物作用时间的延长，线粒体膜电位逐渐下降，且呈时间依赖性。结论：1、灭多威可诱导MDEC-07114细胞凋亡；2、灭多威诱导MDEC-07114细胞凋亡过程中，可能有线粒体途径参与。