lincRNA-CDM竞争结合let-7上调Cyclin D1促进膀胱癌演进的机制研究

Recent studies revealed that deregulation of long intergenic noncoding RNA(lincRNAs) play important role in cancinogenesis, acting as oncogenes or tumor suppressor genes.Our previous research showed that lincRNA-CDM is overexpressed in bladder cancer tissue. Knock down of lincRNA-CDM in bladder cancer cells decelerated biological activity of proliferation, motility and invasiveness,and tumor cells were arrested at G0/G1.Further Study showed knock down of lincRNA-CDM up-regulating Cyclin D1 expression. Bioinformatic analysis showed that lincRNA-CDM and Cyclin D1 3'-untranslated region share several let-7 binding sites. Therefore,we propose the new mechanism that lincRNA-CDM modulates cyclin D1 expression through binding let-7 competitively thus decreases the inhibitory effect of let-7 on cyclin D1 and promotes bladder cancer progression. This study is aimed at exploring function and mechanism of lincRNA-CDM in vitro and in vivo, providing theoretical evidence for bladder cancer targeting therapy.

最近研究表明长链基因间非编码RNA（lincRNAs）的异常表达在肿瘤中起着癌基因/抑癌基因的作用。我们预实验发现lincRNA-CDM在膀胱癌组织中过表达，下调lincRNA-CDM表达能使膀胱癌细胞增殖、迁移及侵袭能力下降；细胞阻滞在G1期，且周期蛋白cyclin D1 表达明显下调。生物信息学分析提示lincRNA-CDM与 cyclin D1 3'-UTR均有多个miRNA let-7结合位点。由此，我们提出lincRNA-CDM在膀胱癌中的作用新机制，即：lincRNA-CDM通过竞争性结合let-7，减少了let-7对Cycin D1的抑制作用，从而促进膀胱癌演进和转移。本研究拟在体内外实验水平研究lincRNA-CDM的功能，获得lincRNA-CDM通过竞争性结合let-7，上调CCND1表达的可靠依据，分析lincRNA-CDM与膀胱癌临床病理指标的关系，指导临床实践。

项目背景：.膀胱癌是我国泌尿男生殖系统最常见的恶性肿瘤，具有易复发、进展、转移特点。研究表明lincRNA在一些肿瘤的发生、发展、转移中行使着重要的功能。lincRNA在膀胱癌中的表达及作用尚未阐明。进一步鉴定膀胱癌中差异表达的lincRNA并阐明其作用机制，有利于发现膀胱癌新的靶点和肿瘤标记物。.主要研究内容：.1.通过体内外实验进一步确定lincRNA-CDM对膀胱癌细胞增殖、凋亡、侵袭、转移能力等生物学行为；.2.证实lincRNA-CDM通过“吸附”互补的miRNA let-7，导致let-7对下游靶基因Cyclin D1等的转录后抑制作用减弱，Cyclin D1等表达增加。.3.评价lincRNA-CDM及其他差异表达lincRNA表达与膀胱癌患者临床、病理指标、生存时间的关系，评价lincRNA-CDM等的表达量是否可以作为膀胱癌患者预后的独立指标。.重要结果：.1.筛选出膀胱癌中差异表达的lincRNAs并鉴定出在膀胱癌组织中高表达的lincRNA-CDM。.2.体外功能实验表明lincRNA-CDM具有癌基因功能，可以促进膀胱癌细胞增殖，迁移及侵袭。 .3.luciferase实验、RIP实验、RNA pull down实验证实lincRNA-CDM可以跟microRNA let-7结合，并且荧光素酶实验结果表明lincRNA-CDM竞争性吸附let-7b上调CCND1。.4.证实了lincRNA-CDM在膀胱癌组织中高表达，并且与膀胱癌患者的预后相关。..关键数据及其科学意义：.1.首先鉴定出具有促癌功能的长链基因间非编码RNA--lincRNA-CDM，明确lincRNA-CDM在膀胱癌中的癌基因的作用，将有利于进一步阐明膀胱癌的发病机理，为膀胱癌的诊断和治疗开辟新领域。.2.提出lincRNA-CDM调控Cyclin D1促进膀胱癌细胞迁移的新机制，即：膀胱癌中高表达的lincRNA-CDM通过竞争性结合let-7，let-7对Cyclin D1等增值、迁移、侵袭相关基因抑制作用减弱，导致Cyclin D1表达增强，进而促进膀胱癌细胞迁移和转移。.3.证明lincRNA-CDM与膀胱癌患者的预后相关，对于在临床决策中筛选高危患者，提前采用综合治疗延缓肿瘤的复发和转移，延长患者生命，有一定的临床实践指导意义。