基于探针熔解曲线分析的结核分枝杆菌长片段多态性分型技术研究

Tuberculosis (TB) is a leading cause of death among infectious diseases worldwide. Genotyping technology is a powerful tool for molecular epidemiologic research, which has contributed significantly to understand the transmission dynamics of TB. However, a simple, rapid, reproducible and standardized genotyping method is urgently needed for clinical application. Previously, we have developed a rapid spoligotyping assay based on melting curve analysis. Meanwhile, we firstly established a dynamic database online for sharing genotyping information and tracking research in China based on this technology. In this project, we are going to develop a new genotyping method for Mycobacterium tuberculosis complex strains based on large sequence polymorphisms (LSP). We will evaluate the discriminatory power and get further insights into the distribution of Beijing family strains. Overall, our research will be beneficial for the establishment of the tracing network and improve the efficiency of tuberculosis control.

结核病是对人类健康最具威胁的传染性疾病之一。基因分型技术是结核病分子流行病学研究的核心技术。目前，临床上缺乏简便、快速、重复性好和易于规范化的结核分枝杆菌基因分型技术。此前，申请人及其团队已成功建立了基于探针熔解曲线分析的结核分枝杆菌间隔子寡核苷酸多态性快速分型技术，并基于该技术率先在国内建立了动态在线共享数据库。在本项目中，针对该技术对主要流行的北京家族菌株区分能力有限的问题，申请人拟将长片段多态性（LSP）分析引入这一快速分型体系，建立一种结核分枝杆菌LSP快速分型技术，进一步提高体系的分辨率，探索北京家族菌株的微群体结构及其耐药表现特征。本项目的完成将为全面开展结核分枝杆菌基因分型研究提供有力的技术支持，补充并完善现有数据库，为最终在全国建成结核病溯源网络奠定基础，从而提高我国的结核病防控水平。

结核病是对人类健康最具威胁的传染性疾病之一。基因分型技术是结核病分子流行病学研究的核心技术。目前，临床上缺乏简便、快速、重复性好和易于规范化的结核分枝杆菌基因分型技术。此前，申请人及其团队已成功建立了基于探针熔解曲线分析的结核分枝杆菌间隔子寡核苷酸多态性快速分型技术，并基于该技术率先在国内建立了动态在线共享数据库。在本研究中，针对该技术对主要流行的北京家族菌株区分能力有限的问题，基于荧光PCR和毛细管电泳检测平台，开发出一套简便、快速、自动化程度高的菌株定性、定量方案及MIRU-VNTR检测、分析方案，解决了传统方案中PCR扩增稳定性差、检测通量低、对长片段分辨率低、结果判读困难、人工操作步骤多的难题，能够对95%以上的标本进行准确分型，仅需对工作人员进行简单培训即可进行操作。目前，相应的成果已启动产学研转化。该项目的完成将为全面开展结核分枝杆菌基因分型研究提供有力的技术支持，补充并完善现有数据库，为最终在全国建成结核病溯源网络奠定基础，从而提高我国的结核病防控水平。本项目在研究期间共申请国家发明专利1项，发表SCI论文1篇。