多色探针熔解曲线分析技术快速诊断缺失型和非缺失型α-地中海贫血

α-地中海贫血(简称"α-地贫")是我国最常见的单基因遗传病之一，α-地贫突变检测是实施筛查和确诊的关键。然而，复杂的基因结构、多样的突变类型，限制了适合大规模临床应用的通用检测技术的发展。申请者前期在检测我国常见β-地贫突变过程中，提出了多色探针熔解曲线分析技术，实现了两个反应同时检测24种突变。在本项目中，我们拟利用该技术的检测基因拷贝数变化和点突变的能力，建立一种能够检测我国α-地贫所有常见突变类型的分析体系。对于缺失型突变，将采用缺口PCR检测α0-地贫和基因拷贝数比例法检测α+-地贫，完成常见缺失型突变的单反应联合检测；对非缺失型突变，将突变分组,直接采用多重基因分型技术，完成常见点突变的单反应联合检测。作为一种基于实时PCR平台的技术，上述体系的建立将为我国α-地贫的筛查和诊断提供新的高通量手段，进一步提升多色探针熔解曲线分析的技术水平，并为拓展到其它疾病诊断奠定基础。

α-地中海贫血(简称“α-地贫”)是我国南方最常见的单基因遗传病，主要是由α-珠蛋白基因变异引起，α-珠蛋白基因突变检测是实施其防控的关键。然而，复杂的基因结构、多样的突变类型，限制了适合大规模临床应用的通用检测技术的发展。申请人前期开发了可以同时进行多种基因突变检测的多色探针熔解曲线技术，并应用于24种中国常见β-地贫突变的检测。在本项目研究中，申请人突破探针熔解曲线只能用于基因点突变的检测的思维模式，将多色探针熔解曲线技术拓展到基因大片段缺失的检测，建立了可同时检测4种常见缺失型α-地贫突变(--SEA, --THAI, -α3.7和-α4.2)的缺失型α-地贫检测体系和可同时检测6种常见非缺失型α-地贫突变[CD30(delGAG)、CD31(G>A)、CD122(C>G) 、CD59(G>A) 、CD125(T>C) 和CD142(T>C)]的非缺失型α-地贫检测体系。两种体系的分析灵敏度均可达到1 ng人基因组/反应，而不同来源的样本如全血、唾液、羊水、绒毛等均可提取到足量的DNA用于检测。在近千份临床样本的评估中，与对照方法相比，缺失型和非缺失型α-地贫突变检测体系的灵敏度和特异性均为100%。与目前基于反向膜杂交技术、基因芯片技术或Gap-PCR技术相比，本项目所建立的体系可以同一实时PCR平台上实现缺失型和非缺失型α-地贫基因突变的同时检测，无需任何PCR后处理，具有简便、快速、准确、高通量和低成本的特点，在临床上具有广阔的应用前景。