细胞外基质胶原受体DDR2影响黄体血管新生的作用及机制研究

The Incidence of infertility caused by Ovarian vascular abnormalities as high as 5%-8%，Periodic angiogenesis play an pivotal role for the function of ovary。In addition to the hormone, the microenvironment composed by extracellular matrix in ovarian also play an important regulatory role for angiogenesis。Discoidin domain receptor 2（DDR2）is a fibrillar collagen receptor, widely expressed in ovary interstitial and have a cyclic variation，reaches the highest at luteal phase. the Ddr2-/-mice are infertile while the gonadotropin and follicle reserve normal, have disorder of luteinization. Our research found that DDR2 involved in angiogenesis，the vascular density and penetration in Ddr2-/- mice ovary is significantly lower than WT mice at Luteal phase,We hypothesized that the reason of Ddr2-/- mice infertility is corpus luteum dysfunction caused by angiogenesis obstacles. This project intends to Study the effect and mechanism of DDR2 participation in ovulation and luteinization by using Ddr2-/-mice and various research methods such as morphology, cytology and molecular biology methods，to investigate the molecular mechanisms of DDR2 involved in Luteal angiogenesis, to provide a new targe for contraception research and treatment of infertility caused by Ovarian vascular abnormalities.

卵巢血管异常性不孕症发病率高达5%-8%。血管新生是黄体生成中的关键事件，除激素外，细胞外基质构成的微环境对血管新生也起重要调控作用。胶原盘状结构域受体2（Discoidin domain receptor 2 ，DDR2）在卵巢的表达呈周期性变化，黄体早期达最高；Ddr2-/-小鼠在促性腺激素及卵泡储备均正常的情况下不孕、并黄体生成障碍，但机制不祥。我们研究发现，Ddr2-/-小鼠黄体早期血管密度及功能均显著低于WT，推测其可能是血管新生障碍导致黄体功能不全的外周性不孕。本项目拟利用Ddr2-/-小鼠、小分子抑制剂等通过功能学、形态学、细胞生物学及分子生物学方法，深入研究DDR2参与黄体血管新生影响卵巢功能的作用及机制，并阐明DDR2调控HIF-1α影响血管内皮细胞增殖及黄体细胞VEGF分泌的分子机制，对卵巢细胞外基质的作用提出新认识，为血管异常性不孕的诊断治疗及避孕药的研发提供新靶点。

本项目利用Ddr2全身性缺失小鼠、Ddr2血管内皮细胞条件性敲除小鼠，小分子抑制剂等通过功能学、形态学、细胞生物学及分子生物学方法，深入研究了DDR2参与黄体血管新生影响卵巢功能的作用及机制。首先，通过卵巢互换原位移植证明了Ddr2-/-小鼠不孕的原因为卵巢因素导致的外周性不孕；其次，系统的研究了DDR2在卵巢不同年龄和卵泡不同发育阶段的表达和功能，发现DDR2在卵巢的表达呈周期性变化，黄体早期达最高，高表达于颗粒细胞及新生血管内皮细胞，调控卵泡发育及黄体生成；发现Ddr2-/-小鼠自发排卵障碍，对外源性促性腺激素反应低下，排卵数显著减少，黄体生成障碍。再次，发现DDR2缺失抑制卵巢周期性血管新生导致卵泡发育，成熟及排卵障碍，黄体生成障碍，利用Ddr2-/-血管内皮细胞条件性敲除小鼠模型，进一步证实血管内皮细胞DDR2特异性敲除导致不孕，自发排卵障碍，黄体生成障碍，与全身性敲除小鼠表型非常相似，DDR2缺失显著抑制 血管内皮细胞的增殖； 通过体内外血新生模型，发现DDR2调控血管内皮细胞的增殖，迁移及成管能力而抑制血管新生；发现DDR2通过调控P38通路影响内皮细胞的增殖及VEGF的分泌影响血管新生；最后，通过DDR2小分子抑制剂实验发现，DDR2小分子抑制剂可以抑制排卵和黄体生成，达到避孕的目的。本研究对卵巢微环境中细胞外基质胶原受体DDR2的作用提出了新认识，为血管异常性不孕的诊断治疗及避孕药的研发提供了新靶点。