鸭疫里氏杆菌耐药分子机制的研究和快速检测方法的建立

动物源病原菌耐药性已成为了近年来国内外关注的焦点和研究热点,我国畜禽源病原菌的耐药率、耐药谱、耐药水平显著高于其他国家。鸭疫里氏杆菌是严重危害我国养鸭业的重要病原菌，由于大量使用抗菌药物导致目前鸭疫里氏杆菌耐药性非常严重，多重耐药现象十分普遍。国外尚未有关于鸭疫里氏杆菌耐药分子机制的研究报道。本项目将首次系统深入探讨临床分离鸭疫里氏杆菌耐药分子机制的研究，以期摸清鸭疫里氏杆菌耐药分布状况及其耐药基因的流行特征，阐明它们对氨基糖苷类及氟喹诺酮类药物耐药的分子机制及耐药基因传播机制，探索氟喹诺酮耐药靶位突变、主动外排、PMQR因子之间的协作效应，明确鸭疫里氏杆菌耐药性产生与致病性之间的关系，为鸭疫里氏杆菌耐药性的风险评估与控制提供更充分的科学依据，也可为新药创制、临床合理用药、食品安全风险管理提供科学咨询和建议。

用琼脂稀释法对兽医临床分离的103株鸭疫里氏杆菌进行抗菌药物的敏感性测定，采用PCR方法对鸭疫里氏杆菌β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、酰胺醇类、四环素类、磺胺类常见耐药基因和整合子的携带情况进行检测，同时对多重耐药鸭疫里氏杆菌的传播机制进行研究。此外，根据已报道的鸭疫里氏杆菌rpoB、大肠杆菌phoA、沙门氏菌invA、链球菌16s rRNA基因设计引物，建立多重PCR方法，同时检测这四种病原菌。. 结果表明，本研究分离的103株鸭疫里氏杆菌耐药现象比较严重，主要表现为多重耐药，同时携带多种耐药基因。氨基糖苷类钝化酶基因aadA和aac(6’)-Ib、氯霉素类耐药基因clmA、四环素类耐药基因tet(A) 和tet(M) ，以及磺胺类耐药基因sul1是引起鸭疫里氏杆菌对相应抗菌药物产生耐药性的主要原因。Ⅰ类整合子广泛存在于鸭疫里氏杆菌中，且检出率较高，其携带的基因盒主要介导细菌对氨基糖苷类和酰胺醇类抗生素耐药。喹诺酮耐药决定区的基因突变是引起菌株对喹诺酮类药物产生耐药性的主要原因，但还可能存在其他的喹诺酮类耐药机制。β-内酰胺酶不是引起鸭疫里氏杆菌对β-内酰胺类药物产生耐药的主要机制，而外排泵可能是介导鸭疫里氏杆菌对β-内酰胺类药物耐药的主要机制之一。. 建立的多重PCR方法，经过优化条件后，可特异性地检测鸭疫里氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌和链球菌，且对绿脓杆菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌及支原体扩增结果均为阴性。其灵敏性，对鸭疫里氏杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌，可达102拷贝/微升，链球菌为103拷贝/微升。这表明该检测方法有较好的特异性和灵敏性。