利用传毒介体分子伴侣蛋白基因分子调控双生病毒研究

双生病毒是世界范围内广泛发生并引起严重危害的一类植物病毒。随着其传毒介体-B型烟粉虱的迅速扩散，近年来在我国广东、江苏、河南等番茄产区大面积爆发，目前生产上缺乏实用有效的防治措施。双生病毒与其传毒介体烟粉虱之间存在特异性的互作关系，目前报道的两类分子伴侣蛋白BtHSP16和GroEL和传毒密切相关。BtHSP16协助病毒毒粒子跨膜转运和稳定构象；GroEL保护病毒粒子免遭降解。.本项目拟构建表达BtHSP16基因dsRNA和GroEL基因（全长）的转基因植株，该转基因植株在植物韧皮部表达GroEL蛋白，病毒侵染时特异性诱捕病毒粒子，产生对双生病毒的抗性；烟粉虱取食该转基因植株后特异性诱导介体BtHSP16靶基因沉默，使烟粉虱失去传毒能力，切断了传播途径；从而达到抗病和切断传播途径双重目的，建立起高效防控双生病毒新方法。研究结果对防治双生病毒具有重要指导意义。

双生病毒由烟粉虱特异性传播，烟粉虱传毒与其体内分子伴侣蛋白BtHSP16和GroEL基因密切相关。本项目构建表达BtHSP16基因 dsRNA和GroEL全基因的转基因番茄，研究该转基因植株对双生病毒的抗性和对传毒介体烟粉虱传毒能力的干扰。. 克隆烟粉虱体内GroEL基因, 将其连接到韧皮部特异启动子RolC下游, 构建到植物表达载体pBIN19上, 采用农杆菌介导法转化番茄, 获得转基因植株19株。PCR检测和Southern blot结果表明：GroEL基因已经整合到烟草基因组中。TYLCCNV侵染性克隆接种转基因植株，检测发现：1株表现出免疫，大部分表现为耐病。. 克隆烟粉虱体内BtHSP16基因，构建BtHSP16基因片段dsRNA植物表达载体pBIN19-2BtHSP16。通过农杆菌介导的转基因策略将基因转入并整合到番茄中，获得转基因植株29株。PCR检测和Southern blot结果表明：BtHSP16基因已经整合到番茄基因组中。烟粉虱传毒干扰实验发现：转含 pBIN19-2BtHSP16转基因植株对烟粉虱的传毒能力有一定的干扰。. 构建含GroEL基因和BtHSP16基因片段dsRNA双价基因植物表达载体pBIN19-2BtHSP16-GroEL，采用上述相同的方法获得转基因植株66株，对T0代和T1代分别进行农杆菌侵染性克隆接种实验和烟粉虱传毒干扰实验，统计数据表明：T0和T1代转基因植株均抗TYLCV并能干扰烟粉虱传毒能力，这些转基因植株的抗病能力和传毒干扰能力能稳定遗传，且转双价基因植株的抗病能力比转单基因植株的抗病能力和对传毒干扰能力更强。 . 本项目目前已发表中文核心2篇，一般期刊1篇，申请发明专利2项，合著著作1本，另有1篇已投稿Plant disease，2篇SCI正在撰写中。