番茄环纹斑点病毒传毒介体及其传毒相关蛋白鉴定

番茄斑萎病毒属病毒(Tospoviruses)在世界范围内分布广泛，引起多种作物的严重病害。番茄环纹斑点病毒（TZSV）是在云南发现的Tospoviruses一个新种，在番茄、辣椒、烟草、花卉上造成严重经济损失，是云南Tospoviruses的优势种，并有向邻近省区蔓延的趋势。Tospoviruses 在自然条件下由蓟马传播，但TZSV的传播介体蓟马种类尚未确定。本研究拟在前期工作基础上，通过蓟马传毒实验鉴定自然条件下传播TZSV的主要蓟马种类；用原核表达方法表达纯化TZSV编码的糖蛋白（Gn/Gc）和核壳体蛋白（N）、用梯度离心法提纯病毒粒子，并制备抗血清；通过Far western blot技术分离鉴定与原核表达的Gn蛋白、Gc蛋白、N蛋白、病毒粒子互作的TZSV主要传播蓟马传毒相关蛋白。为研究蓟马与TZSV的互作机制积累基础，为有效防控该类病害提供依据。

蓟马传播的番茄斑萎病毒属病毒(Tospoviruses)在世界范围内分布广泛，引起多种作物的严重病害。番茄环纹斑点病毒（TZSV）是在云南发现的Tospoviruses 一个新种，在番茄、辣椒、烟草、花卉上造成严重经济损失，是云南Tospoviruses 的优势种，并有向邻近省区蔓延的趋势。项目对云南Tospoviruses主要发生区的蓟马种群进行鉴定，发现4种传播Tospoviruses的蓟马即西花蓟马（F. occidentalis）、花蓟马(F. intonsa)、烟蓟马(Thrips tabaci)和棕榈蓟马(T. palmi)，优势蓟马种群是西花蓟马。传毒实验表明，西花蓟马能够传播TZSV,饲毒后的烟蓟马在植物上喂养后，植物不能检测到TZSV也不显症，饲毒TZSV的花蓟马不能完成世代循环。获得原核表达Gn、N、NSs、NSm蛋白兔多抗血清以及提纯N蛋白的兔抗血清，最高效价为1/16384，最佳为1/5000，特异性良好。蓟马I龄若虫是蓟马能否传毒的关键，采样双向电泳（2-DE）分离蓟马总蛋白，通过far western 从蓟马总蛋白中筛选出与病毒Gn和N蛋白特异性结合的蛋白因子。项目研究分析了与Gn、N蛋白互作的蓟马I龄若虫蛋白，发现6个蛋白可以特异性地与TZSV N蛋白结合，这6个蛋白pI 值在5-7之间，属于酸性蛋白，分子量从30 kDa到60 kDa不等，根据分子量将6个蛋白分别编号为：p62、p50、p47、p40-1、p40-2、p30；有13个蛋白可以特异性地与TZSV Gn蛋白结合，将13个蛋白分别编号为：p50、p47、p45-1、p45-2、p40-1、p40-2、p34、p29、p28-1、p28-2、p26、p24、p22。发现其中p50、p47、p40-1、p40-2四个蛋白点既能和TZSV N蛋白结合，也能和TZSV Gn蛋白结合。与Ⅱ龄若虫互作：结果显示有2个蛋白点可以特异性地与TZSV N蛋白结合，这2个蛋白点pI 约为4左右，属于酸性蛋白，分子量分别为45 kDa和50 kDa。将这两个蛋白分别编号为：p2-45、p2-50。进一步工作将会对这些蛋白进行质谱分析，以便确定蛋白的基因及特性，为解析病毒侵入蓟马、在蓟马体内运输、复制等机制奠定基础。