核受体Nur77乙酰化修饰对激活的巨噬细胞生物学功能的调控作用及机制

动脉粥样硬化是慢性炎症性过程，激活的炎症是斑块破裂的主要因素。巨噬细胞是血管炎症反应的主要效应细胞，探讨巨噬细胞炎症反应及吞噬清除功能的调控机制，是调控粥样斑块稳定性的关键。我们前期的研究发现在激活的巨噬细胞中，核受体Nur77参与了脂质负荷、炎症反应的调控。而核受体受到刺激后瞬间诱导表达，在体内不稳定，翻译后乙酰化修饰对于其功能是非常重要的，影响了其核定位、稳定性以及与其他共因子和蛋白的相互作用。通过乙酰化和去乙酰化的方式改变蛋白结构，进而影响其功能和调控，已成为肿瘤、炎症性疾病等药物开发的新方向。而在激活的巨噬细胞系统中，Nur77乙酰化修饰对巨噬细胞生物学功能的影响目前未见相关报道。此次课题中，我们拟探讨Nur77乙酰化修饰的影响因素、对激活的巨噬细胞生物学功能的调控作用，进而对动脉粥样硬化斑块稳定性的调控作用及机制，以探索通过改变蛋白质修饰状态治疗动脉粥样硬化斑块的可行性及有效性。

动脉粥样硬化是慢性炎症性过程，激活的炎症是斑块破裂的主要因素。巨噬细胞是血管炎症反应的主要效应细胞，探讨巨噬细胞炎症反应及吞噬清除功能的调控机制，是调控粥样斑块稳定性的关键。在该课题中，我们探讨了核受体Nur77对巨噬细胞凋亡，自吞噬等生物学功能的调控作用，乙酰化修饰的影响因素以及对其功能的调控作用。我们发现，核受体Nur77参与了脂质负荷（oxLDL)诱导巨噬细胞凋亡的调控，其通过p38信号通路调控巨噬细胞的存活，进一步机制研究表明Nur77不影响细胞周期增殖相关基因PCNA，p21，抑制细胞凋亡相关基因Caspase3，抑制了炎症诱导的巨噬细胞的凋亡，促进了巨噬细胞的存活。Nur77通过其转录活性抑制了oxLDL诱导的巨噬细胞向树突状细胞分化，包括细胞形态学改变，细胞表面标志物的改变，抑制了oxLDL诱导的细胞内吞作用，T细胞增殖，以及炎症因子的分泌。激活内源性Nur77，增加了巨噬细胞的自吞噬，且抑制了炎症因子的分泌。使用具乙酰化功能的p300质粒转染细胞后，呈剂量依赖性增加了Nur77蛋白的表达，且增加了蛋白的稳定性。通过乙酰化处理后，进一步抑制炎症因子的分泌。我们还发现，他汀类药物阿托伐他汀呈剂量依赖性上调了Nur77的表达。同时， 阿托伐他汀呈剂量依赖性抑制了oxLDL诱导的巨噬细胞形态学的改变，抑制了炎症因子TNFα、MCP-1的分泌；抑制了促炎症介质COX-2表达，进一步作用机制表明他汀类通过上调Nur77的表达及抑制了信号通路ERK1/2的磷酸化和IκBα 的降解，抑制炎症因子的分泌，发挥抗炎症的作用。在不稳定斑块研究中,我们还发现，ApoE基因敲除小鼠，阿托伐他汀显著减少了巨噬细胞入侵，内皮下脂质沉积，减少内膜胶原的成分和MMPs的表达，从而改善斑块的稳定性，进一步机制研究表明，阿托伐他汀抑制了炎症因子MCP-1及CX3CL1的表达，及其受体CCR2及CX3CR1的表达，且在动物血清中发现炎症反应蛋白CRP及肿瘤坏死因子TNFα的表达下降。该课题通过核受体生物学功能，蛋白翻译后修饰及动脉粥样硬化不稳定斑块研究，发现蛋白乙酰化修饰，增加了蛋白的稳定性，更好地促进了其对炎症反应，凋亡及吞噬功能的调控作用，进而对动脉粥样硬化斑块稳定性的调控，可能成为动脉粥样硬化治疗的新靶点。