特异性扩增活化自体淋巴细胞（EAAL)治疗卵巢癌的作用机制

采用体细胞辅助治疗肿瘤尽管日益被重视，但效果仍不尽如人意。"扩增活化的自体淋巴细胞（Expanded Activated Autologous Lymphocytes，EAAL）"技术具有体外扩增效率高，所需外周血少，简单方便的优越性，受到广泛关注，但该技术为非特异性EAAL，今后特异性EAAL细胞治疗将成为治疗肿瘤的趋势。6B11微抗体是我室制备并获得专利，在卵巢癌中具有免疫调节作用。本课题拟研究微抗体和OC166-9抗原负载DC体外诱导特异性EAAL，对卵巢癌系细胞和自体卵巢癌细胞进行杀伤试验，研究T-reg细胞、FoxP3基因及各项细胞因子在特异性EAAL和非特异性EAAL两组的变化，并通过建立荷鼠瘤模型进一步验证特异性EAAL的治疗效果，探讨特异性EAAL是否通过打破机体的免疫耐受，调节卵巢癌免疫微环境，以达到对肿瘤细胞的杀伤，为进一步用于临床治疗卵巢癌提供理论依据。

本课题旨在通过抗独特型微抗体6B11体外诱导卵巢癌特异性EAAL细胞，体外观察该细胞对表达卵巢癌相关抗原的卵巢癌细胞的杀伤效果。为临床特异性体细胞治疗晚期或复发性卵巢癌开辟新途径并提供理论支持。第一部分 COC166-9是由北大人民医院妇瘤中心研制的的抗卵巢癌单克隆抗体，但其对应抗原（COC166-9-Ag）及抗原表达的临床意义尚不清楚。 结果表明：IGHG1对抗原表达阴性细胞HOC1A具促增殖、迁移和侵袭的能力，对抗原表达阳性细胞Caov-3无作用；而单抗COC166-9则能抑制抗原表达阳性细胞Caov-3的增殖、迁移和侵袭，对抗原表达阴性细胞HOC1A的增殖、迁移和侵袭能力无影响。第二部分 分离HLA-A2健康人外周血单核细胞，利用细胞因子诱导培养树突状细胞，作为刺激细胞；经负载6B11并刺激自体T细胞后，再作为效应细胞用于细胞增殖分析。利用流式细胞分析术测定CD4 T细胞内细胞因子的产生情况，以判断6B11 Th表位肽所诱导的CD4 T细胞反应的极化情况。分离HLA-A2健康人周血单核细胞，利用细胞因子诱导培养树突状细胞，鉴定获得成熟树突状细胞，刺激自体T细胞建立特异性T细胞系作为效应细胞；进行细胞毒分析实验（51Cr释放实验）。以K562细胞为靶细胞进行细胞毒分析实验；通过ELISA细胞因子测定实验，分析所诱导免疫反应的极化趋势,6B11 MINI EAAL应用能诱导出更有效的抗卵巢癌免疫反应。所诱导的特异性T细胞均分泌高水平的IL-2和IFN-γ，均存在卵巢癌抗原特异性细胞。