Heregulin-α结合ErbB2/ErbB3异二聚体受体后在乳腺增生发生过程中发挥作用的机制

Hyperplastic disease of breast (HDBA) is a common female breast disease, ranked first within women chronic common diseases. But the pathogenesis of this disease is not yet clear. Literature shows that breast autocrine growth factor Heregulin-α (HRG-α) participates in the proliferation / apoptosis process of the normal breast and breast cancer, so we speculate HRG-α may also be involved the process of HDBA. Our previous studies have shown that HDBA incidence is related to HRG-α. HRG-α binding different receptors had different effects. Therefore, this project aims to study the regulatory mechanisms and targets of HRG-α after binding different receptor in pathogenesis process of HDBA. And the main contents include: ①To clear the expression and localization of HRG-α in the pathogenesis of HDBA by laser confocal microscopy technology. Further to prove the combination relations between HRGα and its receptors. (2) To explicitly clear the proliferation role of HRG-α in HDBA pathogenesis. Then clarify the balance between cell proliferation and apoptosis by HRG-α regulation. Finally find out the regulatory mechanism difference between HDBA and normal breast development. We hope to reveal HRG-α regulation mechanisms and targets in pathogenesis process of HDBA. This will provide a new clue to the prevention and treatment of HDBA. Therefore this study is very important.

乳腺增生病（HDBA）为女性常见乳房疾病，但该病的发病机制尚未清楚，国内外文献表明，乳腺自分泌生长因子Heregulin-α（HRG-α）参与正常乳腺和乳腺癌的增殖/凋亡过程，故我们推测HRG-α也可能参与HDBA发生过程。我们前期研究结果发现HDBA发病过程与HRG-α的紊乱有关，即与HRG-α所结合的受体不同有关，故本课题旨在研究HRG-α在HDBA发病过程中所结合不同受体的调控机制和作用靶点，拟采用以下研究：①明确HRG-α在HDBA发病过程中的表达和定位，并进一步探明HRG-α与受体之间的结合关系，阐明调控细胞增殖与凋亡间的平衡关系；②通过对比分析正常与HDBA发病过程中HRG-α所结合受体、信号转导通路的异同，揭示出HRG-α在HDBA发病过程中的调控机制和作用靶点，为预防和治疗HDBA提供一条新的线索，具有重要意义。

乳腺增生病（HDBA）为女性常见乳房疾病，但该病的发病机制尚未清楚。本课题通过研究明确HRG-α 及其受体ErbB2、ErbB3和ErbB4在小鼠正常乳腺和HDBA 乳腺内的时空表达变化规律和时空结合情况、行使的主要功能，揭示HRG-α在HDBA发病过程中的调控机制和作用靶点。妊娠期，HRG-α能够促进Rab3A、STAT5、p42/p44、p38和PKC的磷酸化，刺激乳腺上皮细胞的增殖和分化，增加并维持β-酪蛋白的表达和分泌；泌乳期，HRG-α能够促进Rab3A、STAT5、p38的磷酸化并抑制PKC磷酸化，维持泌乳期乳腺形态，促进乳蛋白的合成和分泌；退化期，HRG-α能够促进Rab3A、STAT3a/3b 磷酸化并抑制PKC的磷酸化，启动乳腺上皮细胞退化，为乳腺组织重建所必需。采用胰蛋白酶和胶原酶分段消化法可以获得大量高纯度并且形态均一的乳腺上皮细胞，该方法简便、易于操作。运用相差显微镜技术和MTT方法证明妊娠期小鼠乳腺为获得细胞的最佳取材时期，最佳生长液为含10％血清pH为7.2、7.4的培养基。采用免疫组化和RT-PCR方法鉴定了标志蛋白角蛋白-18和特异性分泌蛋白β-酪蛋白，证明所获得的细胞为乳腺上皮细胞，并具有正常分泌乳蛋白的功能，成功建立小鼠乳腺上皮细胞体外培养体系。采用液相色谱技术及MTT方法证明适宜量HRG-α对小鼠乳腺上皮细胞生长和分泌总蛋白、乳糖均有显著促进作用。体外构建乳腺癌发生模型，添加HRG-α 和ErbB2拮抗剂，揭示不同浓度的HRG对苯并芘诱导小鼠乳腺癌发生过程中的作用不同，低浓度和中浓度的HRG具有明显促进小鼠乳腺癌发生，而高浓度HRG抑制小鼠乳腺癌发生。低浓度、中浓度和高浓度的HRG都显著抑制小鼠乳腺癌发生过程中ErbB2的表达，且抑制程度随浓度增加而增强。低浓度和高浓度的HRG都显著抑制小鼠乳腺癌发生过程中ErbB3和ErbB4的表达。随着ErbB2拮抗剂TAK165浓度的增加早期促进p38和src信号的增加，而在后期60h时，TAK165浓度的增加开始抑制p38和src表达。通过与正常乳腺中调控机制进行对比分析，初步揭示出HRG-α在HDBA 发病过程中的作用靶点为ErbB2受体，通过p38和src信号分子完成作用的。本课题为预防和治疗HDBA提供一条新的线索，具有重要意义。