反式脂肪酸对奶牛乳腺细胞SREBP的调控及抑制乳脂合成的机理研究

乳脂降低综合症（MFD）在奶牛生产中发生率很高。其产生的原因很多，日粮、环境、管理都可能导致MFD的发生。国内外为提高乳中CLA含量所做的研究发现，一些反式脂肪酸能显著抑制乳脂的合成，但其作用机理仍不十分清楚，特别是调节脂质合成的关键转录因子SREBP的受调控机制,及其调控乳脂合成这一信号通路研究匮乏。本课题拟利用奶牛乳腺细胞培养模型，在细胞和分子水平研究反式脂肪酸对SREBP的影响及其与乳脂合成的关系。课题在研究脂肪酸对乳腺细胞乳脂合成、分泌的影响的基础上，利用同工酶分析、酶活性测定、实时定量 PCR、双向凝胶电泳、蛋白质印迹等技术，探讨脂肪代谢关键酶、关键转录因子等对乳脂合成的影响及调控机制。该研究有利于揭示相关酶系调控乳脂合成、分泌的机制，为通过基因操作和营养因子调控技术改善乳品质、提高乳脂率提供理论依据，并为在细胞和分子水平研究乳腺养分代谢规律提供研究平台。

乳脂降低综合症（MFD）在奶牛生产中发生率很高。其产生的原因很多，日粮、环境、管理都可能导致MFD 的发生。国内外为提高乳中CLA 含量所做的研究发现，一些反式脂肪酸能显著抑制乳脂的合成，但其作用机理仍不十分清楚，特别是调节脂质合成的关键转录因子SREBP 的受调控机制，及其调控乳脂合成这一信号通路研究匮乏。本课题利用奶牛乳腺细胞培养模型，在细胞和分子水平研究反式脂肪酸对SREBP 的影响及其与乳脂合成的关系。本研究从基因和蛋白两个层面解析了trans10, cis 12 CLA抑制核内活性SREBP-1含量的途径，150nM的trans10, cis 12 CLA可显著降低核内活性SREBP-1含量，150nM tran10,cis12 CLA对ACACA，FAST，SCD1，LPL，THRSP基因表达有降低作用，但对SREBP-1,INSIG1, INSIG2, PPARγ, SCAP, HMGR, FABP3, NR1H3, AGPAT6, DGAT1, ACSS1, ACSS2, LPIN1无显著影响。150nM tran10,cis12 CLA对翻译后SREBP-1前体蛋白无显著影响。150nM tran10,cis12 CLA显著降低SCAP、INSIG1的蛋白表达量，PPARγ的蛋白表达量无显著变化。tran10,cis12 CLA对SREBP-1的转录和翻译水平无显著影响，可能通过显著降低SCAP和INSIG1在翻译后加工修饰水平调控SREBP-1翻译后的加工修饰过程。trans10, cis 12 CLA通过SREBP-1显著抑制脂肪合成和去饱和基因ACACA、FAS和SCD1的mRNA表达，并上调LCFA激活和FA转运基因CD36和ACSS2的mRNA表达。用trans10, cis 12 CLA处理MAC-T的过程中，26S蛋白酶体是非常重要。该研究为在细胞和分子水平研究奶牛脂肪酸代谢及乳腺养分代谢规律提供研究平台。