PPAR-γ在大鼠溃疡性结肠炎中的动态表达及疏肝健脾法的干预作用研究

溃疡性结肠炎（UC）是一种呈慢性经过、反复发作的结肠炎症, 治疗难度大，是结肠癌的癌前病变。UC迄今无特异性治疗方法，西药治疗UC副反应多。以疏肝健脾法为指导的痛泻要方加减治疗UC具有可靠的临床疗效，但其抗UC作用的分子机理尚不清楚。我们研究发现, 痛泻要方及其加减方对TNBS/乙醇诱导的大鼠胃肠黏膜损伤具有保护作用。由于过氧化物酶体增值物激活受体-γ(PPAR-γ)的激活是UC肠道炎症及免疫反应发生的关键环节。本研究采用放射免疫法、RT-PCR法及免疫组化技术动态观察PPAR-γ在大鼠UC进程中不同时间点的表达变化规律，并进一步观察PPAR-γ表达变化与IL-1β、TNF-α、ICAM-1、NF-κB p65之间的关系，并采用疏肝健脾代表方痛泻要方进行干预治疗，从分子水平阐明疏肝健脾法治疗UC作用机理和科学内涵，为该治法临床广泛应用提供佐证。

本项目按照研究计划完成了相关内容，并增加了检测结肠组织中 ERK1/2蛋白和基因表达的指标。我们采用TNBS/乙醇溶液灌肠法及束缚法制作UC肝郁脾虚大鼠病证模型，采用疏肝健脾法的代表方痛泻要方进行干预。采用 ELISA 法检测各组大鼠血清中IL-1β、TNF-α水平，采用免疫组化SP 法、RT-PCR及Western blot法检测结肠组织中ICAM-1 mRNA、NF-κB p65、PPAR-γmRNA及蛋白表达。实验一选用单纯的UC疾病模型，通过结肠组织中PPAR-γ及其相关因子的动态表达观察，预期证实PPAR-γ及其相关因子与UC 发病的相关性，实验取得了预期成果。我们对实验一疾病的模型和实验二病证结合模型进行了比较，结果发现，实验二的病证结合模型比单纯疾病模型病理损伤严重，PPAR-γ的表达亦比之更少，说明肝郁脾虚因素是导致UC发病和加重的重要原因。研究结果表明，TNBS/乙醇灌肠法可成功建立 UC 大鼠模型，肉眼观察及光镜镜观察均出现明显的炎症、溃疡。且结肠损伤随着造模时间不同呈现动态变化趋势，其中以3 d 和7d 的病变最为严重，14d和21d天则炎症和溃疡有所修复，在UC模型的急性期，结肠组织中 PPAR-γ表达显著降低，慢性期PPAR-γ表达略有升高。UC模型的急性期 NF-κB p65、ICAM-1表达显著升高，慢性期，NF-κB p65、ICAM-1表达略有降低；促炎因子TNF-α、IL-1β和抗炎因子IL-4的平衡参与了 UC 的发生、发展；PPAR-γ 的表达与结肠组织损伤程度、IL-1β、TNF-α、NF-κB p65、ICAM-1的表达之间呈不同程度的负相关；UC 的发生与发展与PPAR-γ 的表达受抑密切相关，上调 PPAR-γ 的表达有望成为 UC 治疗新靶向；痛泻要方对肝郁脾虚型UC模型大鼠结肠组织具有良好的保护和修复作用，其分子机制可能是上调PPAR-γ mRNA及蛋白表达，抑制结肠组织 ICAM-1 、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达、抑制血清IL-1β、TNF-α的表达，从而减轻结肠炎症反应，起到治疗UC的作用。上述研究结果证实痛泻要方可能具有PPAR-γ激动剂的效用，为进一步开发防治溃疡性结肠炎的优势中成药提供了实验依据。通过本项目的研究培养硕士研究生3名，项目研究结果在国内CSCD期刊发表论文6篇，一般期刊收录3篇。