脂联素对自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的调节机制和防治研究

EAE是T细胞介导的神经系统炎症疾病，是多发性硬化的动物模型，也是研究自身免疫炎症的重要模型。最新报道脂联素在多发性硬化病人血清中显著降低，且治疗康复后回到健康水平。同时脂联素上游调节物PPARγ可抑制TH17分化和EAE发生，暗示脂联素对EAE具有重要调节作用。我们首次发现脂联素可抑制TH17分化，脂联素敲除小鼠EAE加重，证明脂联素对EAE有保护作用，但机制不清。我们认为脂联素可能通过调节不同T细胞分化平衡保护EAE，并可能参与PPARγ对TH17和EAE的调控。本研究拟利用小鼠EAE模型和细胞分化模型研究脂联素对EAE发生的调节作用和分子机制，以及对EAE中T细胞亚群分化平衡的调节机制；研究PPARγ是否通过脂联素调节EAE；研究脂联素蛋白及其激动剂黄芪皂苷对EAE的治疗作用和机制。从分子、细胞和整体水平揭示脂联素对EAE调节作用机制，筛选鉴定脂联素为靶点的EAE治疗新药物。

脂联素是血液中丰富的脂肪因子，可随血液扩散到各个组织器官发挥其调节作用。多发性硬化症（MS）是自身免疫中枢神经系统炎症性疾病，脂联素在MS病人血清中显著降低，且治疗康复后回到健康水平，可能和MS发病相关。实验性自身免疫脑脊髓炎（EAE）是MS的动物模型， 本项目证明了脂联素对小鼠EAE病理发生的调节作用，阐明了脂联素对各种辅助性T细胞分化和EAE发生的分子机制，探索以脂联素为靶点的EAE治疗新途径。.主要研究结果如下：1、脂联素对小鼠EAE发生具有保护作用。脂联素基因敲除后小鼠EAE临床评分升高，脊髓脱髓鞘程度增加，说明脂联素对EAE发生和脱髓鞘的发生具有保护作用；脂联素基因敲除后EAE小鼠脊髓炎症增加，炎症因子IL-1β和TNF-α以及炎症性巨噬细胞标记CD68均显著升高，说明脂联素对EAE小鼠中枢神经系统炎症反应具有保护作用； 2、脂联素对EAE小鼠体内不同T细胞亚群分化具有重要调节作用。脂联素缺失后，小鼠脊髓中T细胞的比例明显增加，这与脂联素缺失小鼠EAE发病加剧相一致。脂联素缺失小鼠脊髓中Th1，Th17细胞转录因子和相关细胞因子T-bet，IFN-γ，RORγt，STAT3，IL-6，IL-17a等表达增加，而Th2细胞转录因子（GATA-3）以及相关细胞因子（IL-4）的表达没有变化；3、脂联素抑制EAE小鼠体内Th17细胞反应。脂联素缺失鼠中MOG抗原特异性的IL-17A的分泌明显增加，而MOG抗原特异性的Th1和Th2因子无显著变化，说明脂联素可靶定Th17细胞，从而影响小鼠EAE发病；4、脂联素重组蛋白可以抑制Th1和Th17细胞的体外分化，但不影响Th2细胞的体外极化。5、体内外实验样品研究证明，脂联素通过激活T细胞中的p-APMK 和SIRT1信号，从而通过激活PPARγ，进而抑制RORγt来抑制Th17细胞分化和中枢神经系统炎症发生以及EAE发病。6、应用脂联素激动剂牛蒡子苷元（Arctigenin）和小白菊内酯（Parthenolode）等，可以抑制Th17细胞分化和中枢神经系统的炎症发生以及EAE发病。.本项目从分子、细胞和整体水平揭示脂联素对EAE调节作用和细胞及分子机制，筛选到脂联素为靶点的EAE治疗新药物，为临床治疗人多发性硬化症提供了新的途径。本项目中脂联素抗炎的生理过程可能与多种疾病相关，因此将具有广泛的医用价值。