OLA1介导的蛋白谷胱甘肽化修饰在大肠癌中的作用机制研究

蛋白谷胱甘肽化修饰(S-glutathionylation)作为一种翻译后修饰（PTM）机制在肿瘤的发展过程中具有重要作用，但其具体分子机制还不十分明确。我们前期工作首次发现与肿瘤转移侵袭密切相关的OLA1基因参与调控蛋白谷胱甘肽化水平。为理解OLA1介导的蛋白谷胱甘肽化修饰在肿瘤进程中的作用，本研究结合免疫共沉淀和LC-MS/MS质谱技术鉴定OLA1互作蛋白，并利用谷胱甘肽化抗体-sepharose柱富集谷胱甘肽化蛋白，在QTRAP质谱平台上定量分析蛋白的谷胱甘肽化水平，鉴定出受OLA1调控的靶蛋白，明确OLA1调控蛋白谷胱甘肽化修饰的机制。进一步在大肠癌不同癌变阶段的组织中筛选有显著差异的谷胱甘肽化修饰的靶蛋白，并研究谷胱甘肽化修饰对靶蛋白功能的改变和对肿瘤细胞生长凋亡转移侵袭的影响，从而明确OLA1介导的谷胱甘肽化修饰在大肠癌发生发展中的作用，并获得有临床应用前景的蛋白靶标。

研究目标：.通过细胞生物学和分子生物学技术方法来对研究OLA1蛋白对肿瘤细胞转移侵袭能力的影响，并明确OLA1在细胞迁移，粘附和浸润以及上皮间质细胞转化（EMT）等肿瘤转移的多个步骤中的作用和内在分子机制， 从而进一步理解肿瘤细胞的转移侵袭的病理机制，为肿瘤的诊治提供研究基础。.研究方法：.选取多种肿瘤细胞系，并应用siRNA和质粒过表达方法，分别构建OLA1的knockdown细胞株和过表达细胞株，在细胞迁移、浸润、粘附以及EMT实验中来研究OLA1对肿瘤细胞转移相关的病理过程的作用。并进一步应用免疫共沉淀和质谱技术来鉴定与OLA1有相互作用的细胞转移相关蛋白，从而明确OLA1调控肿瘤转移的机制。.研究结果：.1．.OLA1是一个肿瘤转移的调控因子，改变OLA1的表达影响了细胞的迁移和侵袭。.2．OLA1 通过调节 FAK的表达和Cofilin的磷酸化而调控细胞黏附，从而影响肿瘤细胞的迁移浸润能力。.3．OLA1通过与GSK3直接的相互作用，导致其磷酸失活，从而促进Snail的稳定性和转录活性，并进而促进肿瘤细胞的EMT。.总结：.本研究发现OLA1该蛋白能够影响肿瘤转移浸润能力，进一步研究发现OLA1 通过抑制 FAK 的表达和促进cofilin的磷酸化，从而降低细胞黏附；另一方面，OLA1又通过促进GSK3β的磷酸化失活，增强其下游Snail的稳定性，促进了肿瘤细胞EMT。最终从两个不同方面促进肿瘤细胞的转移，从而初步明确了OLA1 在肿瘤转移中的作用和分子机制。我们将进一步争取国家自然基金的资助以验证本期实验的结果。