非复制型弓形虫诱导家禽树突状细胞的免疫调节作用研究

Nonreplicating Toxoplasma uracil auxotrophs (NRTUAs) are vaccine strain of uracil auxotrophs to be completely prevented by blocking the de novo pyrimidine synthesis pathway. In animals, NRTUAs only invade host cells but do not replicate. Recent studies have shown that NRTUAs has good biological safety to regulate the host immune system and modulate the immunosuppression in tumor microenvironment. However, immunosuppressive diseases always prevent healthy development of our poultry industry. Therefore, chBM-DCs will be isolated and stimulated with NRTUAs in vitro to evaluate the regulation effect of NRTUAs for chBM-DCs. Meanwhile, we analyze differential gene expression profile of chBM-DCs by RNA-seq and verify the function of the different expression genes to evaluate the regulatory mechanisms of NRTUAs for chBM-DCs. Our research will not only develop new directions and ideas to further study the regulatory mechanism of NRTUAs for avian immunosuppression, but also establish the study foundation for the prevention and treatment of immunosuppressive diseases in poultry.

非复制型尿嘧啶营养缺陷型弓形虫（NRTUAs）是通过基因敲除阻断嘧啶合成途径的尿嘧啶营养缺陷型疫苗株。NRTUAs在动物体内只能入侵细胞，但不能增殖，具有良好的生物安全性，并能够调节宿主的免疫系统，改善免疫抑制微环境。然而免疫抑制性疾病一直以来都是困扰我国养禽业健康发展的问题。因此，将NRTUAs体外刺激鸡骨髓源树突状细胞（chBM-DCs），评价NRTUAs刺激对chBM-DCs的免疫调节效果；利用RNA-seq技术分析chBM-DCs的差异基因表达谱，并对差异表达的重要基因进行功能验证，揭示NRTUAs对chBM-DCs的免疫调节机制。本研究对深入探讨NRTUAs对家禽免疫抑制的调节机制开辟新的研究方向和思路，也为家禽免疫抑制性疾病的预防和治疗奠定了研究基础。

NRTUAs能够调节机体的免疫抑制状态，逆转肿瘤或病原导致的免疫抑制微环境，其关键在于激发受抑制的单核-巨噬细胞系统。由于生理状态下体内多数树突状细胞呈现未成熟状态，需要经过刺激和迁移才能成熟发挥作用；巨噬细胞作为先天性免疫的天然屏障，对病原刺激的响应速度快，却沦为一些胞内病原的“庇护所”，其重新激活成为“武装的巨噬细胞”，对于各类型病原体的入侵，起到更好的防御作用，进而促进树突状细胞的成熟，促进先天性免疫和适应性免疫反应。因此，本项目将鸡骨髓源树突状细胞调整为禽巨噬细胞，研究NRTUAs入侵对禽巨噬细胞的转录组学影响，找到18个免疫调节相关的重要基因，并结合与弓形虫感染相关的重要细胞因子和TLRs的转录水平检测结果，验证NRTUAs入侵HD-11细胞能够激活TLR15/MyD88/NF-κB/IL-1β信号通路的转导，为深入研究NRTUAs调节家禽单核巨噬细胞免疫功能的分子机制开辟新的方向。