水痘-带状疱疹病毒（VZV）免疫逃逸机制与自噬发生的相关研究

During the course of primary infection, varicella-zoster virus (VZV) establishes a lifelong latent infection within the sensory ganglia, from which virus may reactivate years later to cause herpes zoster. VZV replication and the dysfunction of special cellular immunity result in herpes zoster relapse and postherpetic neuralgia. Till now, there is little information about the reactivation mechanism of VZV and its role in the immune system. Some research indicates that during the infection of VZV, large amounts of autophagosomes are produced within the infected cells. Autophagy can improve the biological synthesis and processing of VZV glycoprotein. Based on the confirmed stimulation of duplicating VZV by STAT3, and that HIV is able to inhibit autophagy by STAT3, this project aims to construct the xenotransplantation model with severe combined immunodeficiency (SCID) mice, and investigate autophagy within dorsal root ganglion (DRG) cells both in vivo and in vitro after VZV infection. Further investigate the relationship between autophagy and VZV duplication, and the regulatory mechanism of autophagy through the participation of STAT3. So that to provide some basis in theory for anti-VZV research.

水痘带状疱疹病毒（VZV）长期潜伏于宿主脊髓背根神经节内，当机体免疫低下或外界诱因刺激时可被激活，引起带状疱疹，皮损及后遗神经痛在临床上十分棘手。宿主的细胞免疫功能低下、潜伏病毒的大量复制是引起感染发生及后遗神经痛的常见原因。目前关于VZV的潜伏复制机制及对宿主的免疫调控尚未明确，但有研究提示自噬可能是介导病毒在宿主细胞内复制及调节宿主细胞免疫的重要环节。我们前期关于VZV复制机制的研究发现，STAT3可以促进VZV复制，结合其他研究所证实的活化STAT3对细胞自噬具有抑制作用，该项目旨在深入探讨在神经元细胞内VZV的潜伏复制与自噬发生间的相互关系及作用机制。通过建立重症联合免疫缺陷小鼠异种移植神经元模型，模拟VZV潜伏于人体内的真实环境；利用该模型明确被VZV感染的神经节细胞内自噬的发生情况，判断自噬与VZV复制间的相互关系。本项目的实施可揭示VZV的复制机制，为治疗提供有效靶点。

目的 明确VZV感染与自噬的相互关系,并探讨STAT3信号通路在VZV感染中对自噬和病毒复制的调节作用。方法 1.流式细胞术检测35例带状疱瘆患者外周血CD4+T淋巴细胞中自噬蛋白LC3B、Beclin-1、p62的表达情况，30例健康成人作为对照组；获取12例带状疱疹患者皮损区标本，免疫组化法检测皮肤组织中相关自噬蛋白的表达，透射电镜观察皮肤细胞内自噬体的生成。2.VZV感染的SHSY5Y细胞中，MDC荧光染色观察自噬体，western-blot检测自噬蛋白LC3B-II、Beclin-1、p62的表达。经自噬诱导剂海藻糖和自噬抑制剂3-MA处理感染细胞后，检测VZV滴度，q-PCR检测VZV DNA拷贝值，western-blot检测VZV糖蛋白E(glycoproteinE，gE)表达的变化。3.VZV感染的SHSY5Y细胞中，western-blot检测STAT3、及其下游因子BNIP3的表达及磷酸化情况；经S3I-201阻断STAT3通路后，检测自噬蛋白及VZV复制的变化；经S3I-201阻断STAT3通路后，应用自噬诱导剂海藻糖，检测自噬蛋白及VZV复制的变化。结果 1.带状疱疹患者外周血CD4+T细胞中、皮损区皮肤组织中自噻蛋白LC3B，Beclin-1的表达明显增高(P均<0.05)，p62的表达明显降低(P＜0.05)，皮损区皮肤细胞中自噬体数量明显增高(P＜0.05)｡2.VZV感染的SHSY5Y细胞中，自噬蛋白LC3B-II、Beclin-1的表达明显增高（P均<0.05），p62的表达明显降低（P＜0.05），对自噬进行诱导／抑制后，病毒滴度明显升高／降低，VZV DNA拷贝值明显升高/降低,VZVgE的表达明显升高/降低(P均<0.05)｡3.VZV感染的SHSY5Y细胞中，STAT3的表达及磷酸化、其下游因子BNIP3的表达明显升高(P均<0.05),抑制STAT3后,自噬水平明显下降,VZV复制减弱,而自噬诱导剂海藻糖可逆转这种减弱(P均<0.05)｡结论VZV感染后，T淋巴细胞、皮肤组织、神经细胞中自噬水平升高，自噬的发生对病毒复制产生正性影响，此外，在VZV感染中，STAT3-BNIP3通路的活化可通过正性调控自噬的表达而调控VZV复制。探讨病毒感染性疾病中自噬及其调节通路的作用，将为研宄病毒复制机制及病原体-宿主相互作用机制提供